含磷酯酰胆碱的玻璃酸钠制剂及其治疗骨关节炎机制的研究

论文摘要

骨关节炎（osteoarthritis,OA）是一种严重危害中老年人健康的慢性退行性骨关节病,临床上以膝关节发病最常见。随着社会人口的老龄化,该病的发病率日益上升,我国约有6000万～7000万人患不同程度的OA。按美国风湿病协会分类,OA分为原发性和继发性两种,原发性OA是目前研究的重点。 磷脂（phospholipid,PL）是关节滑液的重要组成成分,它具有优良的关节润滑作用,它还具有清除氧自由基、抑制软骨水合、抗粘连作用等多种生理功能,在正常关节软骨界面还可抑制关节界面的凝胶融合。本课题研究了含磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine,PC）的玻璃酸钠（sodium hyaluronate,SH）制剂及其对OA动物模型的治疗作用和机制。本课题取得了以下几方面的结果。 1 制备了高纯度的PC 本研究通过有机溶剂提取法和柱色谱法分别制备了大豆和蛋黄PC,所得PC样品与PC对照品相比,均显示一致的UV和IR图谱。经薄层色谱（thin-layerchromatography,TLC）检测,产品纯度可达99.0%以上。 2 研究制备了含PC的SH制剂（PSH注射液） 用自制的蛋黄PC制备了低中高3种浓度（0.1%、0.2%和0.4%）的PC脂质体混悬液,分别加入SH,制得含SH 1.0%的PC复方制剂（PSH）,PSH（0.1）、PSH（0.2）和PSH（0.4）注射液。建立了PSH注射液主要质量控制指标,并进行了稳定性考察,表明该制剂具有良好的稳定性。PSH注射液的脂质体形态均匀、分散性好,其流变学性质与文献报道的正常关节滑液的流变学性质类似。 3 研究了PSH注射液对OA动物模型的治疗作用 建立了木瓜蛋白酶诱导的兔OA模型,用3种PSH注射液兔膝关节腔内注射,以生理盐水和SH注射液为对照。给药5周后取材,做光镜观察Mankin评

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 磷脂治疗骨关节炎的可行性分析
• 1 OA治疗的研究进展
• 1.1 OA的定义、分类、发病机制与病理改变
• 1.2 OA的流行病学研究
• 1.3 OA的治疗药物
• 1.3.1 非甾体抗炎药（NSAIDS）
• 1.3.2 肾上腺皮质激素
• 1.3.3 黏弹性补充治疗药物
• 1.3.4 补充软骨基质成分
• 1.3.5 其它
• 2 PL与骨关节
• 2.1 PL的结构和性质
• 2.2 关节滑液中PL的自然存在
• 2.3 PL的作用
• 2.3.1 PL的界面润滑作用
• 2.3.2 PL的抗粘连作用
• 2.3.3 PL关节润滑作用的实验研究
• 2.4 PL与OA
• 2.4.1 PL在OA关节中的变化
• 2.4.2 PL在治疗OA中的应用
• 3 本课题的研究目的及内容
• 3.1 研究目的
• 3.2 研究内容
• 第二章 高纯度磷脂酰胆碱的制备
• 1 材料
• 1.1 原料和试剂
• 1.2 仪器
• 2 方法
• 2.1 蛋黄PC的制备
• 2.1.1 蛋黄PC粗品的制备
• 2.1.2 蛋黄PC的柱色谱精制
• 2.2 大豆PC的制备
• 2.2.1 大豆PC粗品的制备
• 2.2.2 大豆PC的柱色谱精制
• 2.3 PC的薄层色谱（TLC）检测
• 2.3.1 薄板的制备
• 2.3.2 标准溶液的配制
• 2.3.3 点样、展开和显色
• 2.3.4 检测波长的选择
• 2.3.5 PC含量检测限和定量限的确定
• 2.4 PC样品的含量测定
• 2.5 紫外光谱分析
• 2.6 红外光谱分析
• 2.7 有机溶剂残留测定
• 2.8 急性毒性试验
• 3 结果
• 3.1 PC样品的收率
• 3.1.1 蛋黄来源PC的收率
• 3.1.2 大豆来源PC的收率
• 3.2 PC样品的含量
• 3.3 PC样品的紫外光谱
• 3.4 PC样品的红外光谱
• 3.5 蛋黄PC样品有机溶剂残留
• 3.6 动物急性毒性
• 4 讨论
• 第三章 磷脂酰胆碱与玻璃酸钠复方注射液的研制
• 1 材料
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 2 方法
• 2.1 PC脂质体混悬液的制备
• 2.1.1 PC脂质体混悬液的制备工艺
• E的测定'>2.1.2 稳定性参数K_E的测定
• 2.1.3 正交试验设计影响因素和水平的确定
• 2.2 PSH注射液处方的确定
• 2.3 PSH注射液的制备
• 2.4 PSH注射液有关指标的检测
• 2.4.1 PC的含量测定
• 2.4.2 葡糖醛酸含量测定
• 2.4.3 特性黏度测定
• 2.4.4 透光率测定
• 2.4.5 脂质体的形态观察
• 2.4.6 流变学性质的测定
• 2.5 稳定性考察
• 3 结果
• 3.1 PC脂质体混悬液正交试验结果与分析
• 3.2 PSH注射液处方的确定
• 3.3 PSH注射液有关指标检测结果
• 3.3.1 PC的含量
• 3.3.2 葡糖醛酸的含量
• 3.3.3 特性黏度
• 3.3.4 透光率
• 3.3.5 脂质体的形态观察
• 3.3.6 流变学性质
• 3.4 稳定性考察
• 4 讨论
• 第四章 PSH注射液对骨关节炎治疗作用研究
• 1 材料
• 1.1 动物
• 1.2 动物饮食
• 1.3 试验药物
• 1.4 试剂
• 1.5 仪器
• 2 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 造模方法
• 2.3 给药方法
• 2.4 标本的采制及检测
• 2.5 标本观察项目及评分标准
• 2.5.1 观察指标
• 2.5.2 评分标准
• 3结果
• 3.1光镜观察评分
• 3.2电镜观察结果
• 4讨论
• 4.1动物造模的可行性
• 4.2评价指标的选择
• 4.3 PC疗效评价
• 第五章 PSH注射液用于骨关节炎部分作用机制的研究
• 1 材料
• 1.1 试剂
• 1.2 试剂配制
• 1.3 仪器
• 1.4 研究材料取材
• 2 方法
• 2.1 关节软骨PG含量测定
• 2.1.1 关节软骨中GAG的提取
• 2.1.2 总GAG的含量测定
• 2.1.3 HA的含量测定
• 2.2 关节滑液中细胞因子测定
• 2.2.1 IL-1β的含量测定
• 2.2.2 TNF-α与IL-6的含量测定
• 2.2.3 统计学方法
• 3 结果
• 3.1 各组动物软骨中PG的含量
• 3.1.1 各组动物软骨中GAG的含量
• 3.1.2 各组动物关节软骨中HA的含量
• 3.2 各组动物关节滑液中细胞因子的表达水平
• 3.2.1 IL-1β在各组动物中的表达水平
• 3.2.2 TNF-α在各组动物中的表达水平
• 3.2.3 IL-6在各组动物中的表达水平
• 4 讨论
• 4.1 PSH注射液对关节软骨基质PG的影响
• 4.2 关节滑液中炎性细胞因子与OA发病的机制
• 结论
• 本课题的创新点
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表