华蟾毒配基抗肿瘤作用研究及安全性评价

论文摘要

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的皮肤腺分泌的白色浆液,作为传统中药具有强心、抗心律不齐和升压等作用。目前,蟾酥的抗肿瘤作用成为研究的热点。本论文主要研究蟾酥的活性成分华蟾毒配基对人胃癌BGC-823细胞株增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。本研究采用不同组织来源的六种肿瘤细胞株：人胃癌细胞株（BGC-823和SGC-7901）、人宫颈癌细胞株（HeLa）、人乳腺癌细胞株（MCF-7）、人肝癌细胞株（SMMC-7721）和人急性早幼粒白血病细胞（HL-60）作为体外细胞模型,检测了华蟾毒配基对其增殖抑制活性,MTT结果显示华蟾毒配基对上述六种细胞株均具有显著增殖抑制作用,且具有时间、剂量依赖性。但对不同组织来源的细胞其抑制强度不同,其中华蟾毒配基对BGC-823细胞最为敏感,半数抑制浓度为0.095μM。通过Hoechst 33258染色观察和流式细胞仪检测sub-G1凋亡峰发现,华蟾毒配基可以有效诱导BGC-823细胞凋亡性死亡；同时发现华蟾毒配基诱导的细胞凋亡与上调NF-κB的表达有关,通过NF-κB抑制剂PDTC的加入证实了这一点。我们采用全细胞膜片钳技术检测了华蟾毒配基对BGC-823细胞离子通道电流的影响,结果显示华蟾毒配基可以抑制BGC-823细胞钾离子通道电流,0.05μM和0.25μM的华蟾毒配基使钾离子通道电流分别降低到对照组的82.7±2.9%和51.3±1.7%。此外,我们进行了华蟾毒配基在小鼠体内的安全性评价,通过morris水迷宫实验和HE组织化学染色,结果显示高浓度的华蟾毒配基（>1.5 mg/kg）具有认知功能损伤和心肌毒性。以上研究结果表明,华蟾毒配基能够有效诱导BGC-823细胞凋亡,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关,为华蟾毒配基在抗肿瘤中的应用奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 肿瘤的发生发展
• 1.1.1 肿瘤的发生发展与细胞凋亡
• 1.1.2 肿瘤的发生发展与离子通道
• 1.2 细胞凋亡及分子机制研究进展
• 1.2.1 细胞凋亡的一般概念
• 1.2.2 细胞凋亡通路
• 1.2.3 细胞凋亡主要调控因子
• 1.3 抗肿瘤中药的研究与应用
• 1.3.1 生物碱类
• 1.3.2 甙类
• 1.3.3 黄酮类
• 1.3.4 萜类
• 1.3.5 动物药类
• 1.4 蟾酥的研究概况
• 1.4.1 蟾酥化学成分的研究概况
• 1.4.2 蟾酥药理作用的研究概况
• 1.5 本论文的选题依据及研究内容
• 2 华蟾毒配基对体外培养细胞的生长抑制作用
• 2.1 实验材料及设备
• 2.1.1 试剂
• 2.1.2 仪器
• 2.1.3 细胞株
• 2.1.4 溶液配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 MTT法检测两种蟾毒配基对细胞的抑制率
• 2.2.3 统计学处理
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 MTT法检测两种蟾毒配基对肿瘤细胞存活率的影响
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 3 华蟾毒配基抗肿瘤作用机理研究
• 3.1 实验材料及设备
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 仪器
• 3.1.3 溶液配制
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 细胞培养
• 3.2.2 细胞的形态学观察
• 3.2.3 DNA含量的分析
• 3.2.4 MTT分析
• 3.2.5 流式细胞仪测定NF-κB的表达
• 3.2.6 电极制备
• 3.2.7 全细胞膜片钳记录
• 3.2.8 统计学处理
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 华蟾毒配基诱导BGC-823细胞凋亡的形态观察
• 3.3.2 华蟾毒配基诱导BGC-823细胞凋亡定量分析
• 3.3.3 PDTC影响华蟾毒配基介导的细胞生长抑制
• 3.3.4 PDTC影响华蟾毒配基介导的细胞凋亡
• 3.3.5 华蟾毒配基上调NF-κB蛋白表达
• 3.3.6 华蟾毒配基对离子通道电流的影响
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 4 华蟾毒配基的安全性评价实验
• 4.1 实验材料与设备
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验设备
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 实验动物
• 4.2.2 药物配制
• 4.2.3 动物分组和给药
• 4.2.4 Morris水迷宫实验
• 4.2.5 器官处理
• 4.2.6 体重变化测定
• 4.2.7 脾重指数、
• 4.2.8 苏木精-伊红（HE）染色
• 4.2.9 统计学分析
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 华蟾毒配基对小鼠外观的影响
• 4.3.2 华蟾毒配基对小鼠脾重指数的影响
• 4.3.3 华蟾毒配基对小鼠行为学变化的影响
• 4.3.4 华蟾毒配基对小鼠主要器官毒性作用
• 4.4 讨论
• 4.5 小结
• 结论与展望
• 结论
• 展望
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢