新型高效Src激酶抑制剂KX01对角膜新生血管抑制作用的研究

论文摘要

目的:探讨强效Src激酶抑制剂KX01对血管内皮生长因子介导的细胞生长和移行的抑制作用以及对化学损伤引起的大鼠角膜新生血管形成的治疗作用。方法:用放射性Src检测试剂盒测定首先检测KX01对Src激酶活性的影响。然后分别用MTT法检验KX01对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖的作用;用培养细胞划痕愈伤法检验KX01对HUVEC移行的作用;用流式细胞仪技术检验KX01对HUVEC凋亡的影响。免疫印迹法检测KX01对VEGF信号调节因子FAK以及STAT3表达水平的影响。同时应用化学灼伤法制备大鼠角膜新生血管模型,检测20nM的KX01对角膜新生血管治疗的可行性。结果:KX01对Src激酶的抑制具有剂量依赖性。MTT法和细胞划痕愈伤实验的结果证实浓度为20nM的KX01用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)时无细胞毒性,可以明显抑制VEGF介导的细胞增殖和移行( P<0.05 )。通过免疫印迹法证实在KX01处理组中Src信号表达减少,其中包括磷酸化FAK及STAT3的减少。以硝酸银烧灼法制备大鼠角膜新生血管模型,以浓度为20nM的KX01局部点眼后可以明显抑制角膜新生血管形成。角膜石蜡切片染色发现大鼠角膜基质CD31表达及淋巴细胞浸润减少。结论:KX01对于在血管发生过程起关键作用的内皮细胞增殖移行有明显抑制作用,有望成为角膜新生血管的新型治疗药物。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词
• 第一章 序论
• 1.1 角膜新生血管概述
• 1.2 角膜新生血管可能病因
• 1.3 角膜新生血管的治疗
• 1.4 促血管生成因子与血管形成
• 第二章 实验方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 Src 激酶活性测定
• 2.3 细胞传代培养
• 2.4 细胞毒性测定
• 2.5 细胞周期检测
• 2.6 HUVEC 移行检测
• 2.7 免疫印迹检测
• 2.8 大鼠新生血管模型
• 第三章 实验结果
• 3.1 体外 KX01 对 Src 酪氨酸激酶活性抑制作用
• 3.2 KX01 的细胞毒性
• 3.3 KX01 抑制 HUVEC 细胞移行
• 3.4 KX01 抑制 Src 激酶依赖的 FAK 及 STAT3 磷酸化
• 3.5 在大鼠新生血管模型中 KX01 对血管形成的抑制
• 第四章 讨论
• 4.1 酪氨酸激酶抑制剂的作用途径
• 4.2 剂量选择
• 4.3 KX01 抑制血管内皮细胞移行
• 4.4 KX01 抑制 Src 激酶依赖的 FAK 及 STAT3 磷酸化
• 4.5 KX01 抑制大鼠角膜新生血管
• 4.6 血管生长因子抑制剂治疗角膜新生血管
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文
• 个人简历