论文摘要
目的: 构建癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）与热休克蛋白70（heat shock proteins, HSP70）的真核双表达质粒,以其免疫小鼠,观察其诱导的细胞免疫应答情况,以探求预防和治疗结肠癌术后复发的新策略。方法:采用RT-PCR 方法克隆CEA 及HSP70 cDNA 序列,并利用酶切、连接等手段将CEA 及HSP70 定向克隆至真核双表达质粒中pIRES。用脂质体法将质粒pIRES、pIRES-CEA 、pIRES-HSP70、pIRES-CEA-HSP70 转染CHO 细胞,G418 筛选阳性转染细胞,ELISA法检测CEA 表达。将上述四种质粒作为核酸疫苗免疫小鼠,MTT 比色法检测小鼠脾淋巴细胞对结肠癌细胞CW-2 的细胞杀伤效应。结果:经酶切鉴定、PCR 鉴定与序列测定, 证实真核双表达载体pIRES-CEA-HSP70 构建成功。转染pIRES、pIRES-CEA 、pIRES-HSP70、pIRES-CEA-HSP70 的细胞CEA 表达分别为0.00ug/L、8.75±0.82 ug/L、0.00ug/L、6.86±0.62 ug/L.。pIRES-CEA-HSP70 免疫组的细胞杀伤率在效靶比50:1、25:1、12.5:1、6.25:1 下分别为35.425±3.877%、26.875±3.171%、20.325±1.916%、15.550±0.759%,均明显高于其余三组,差别有显著性意义（p<0.01）。pIRES、pIRES-CEA 、pIRES –HSP70 组杀伤率差别无显著性（p>0.05）。结论: 核酸疫苗pIRES-CEA-HSP70 可诱导机体产生特异性细胞免疫应答,为其用于结肠癌的治疗提供实验基础。
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