导读:本文包含了抑制性消减杂交方法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鹅肥肝,SSH,荧光定量qRT-PCR,差异表达基因
抑制性消减杂交方法论文文献综述
朱丽慧[1]（2010）在《抑制性消减杂交方法筛选鹅肥肝中差异表达基因》一文中研究指出本研究以朗德鹅为试验材料,运用抑制性消减杂交(SSH)技术检测填肥组和对照组之间的差异表达片段,将所获得的差异片段克隆测序后与GenBank中已知基因进行序列比对,寻找差异片段的同源基因或序列,对筛选出的差异表达基因进行功能聚类分析和代谢途径分析(KEGG),推测筛选的基因的功能,并绘制肥肝形成过程中脂类代谢调控示意图。选择12个与脂类代谢或糖代谢相关的基因进行荧光定量PCR(qRT-PCR)验证,并检测其中4个基因的时空表达规律,另外还测定了朗德鹅填肥前、填肥10天和填肥20天的血清生化指标和组织营养成分等。结果如下:(1)填肥鹅血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油叁酯(TG)、总胆固醇和高密度脂蛋白(HDL)水平显着增加,γ-谷氨酰转肽酶(GGT)在填肥过程中呈现出先升高后降低;脂肪主要在肝脏沉积,其他组织无明显差异,蛋白质在肌肉和肝脏中相对增加;填饲朗德鹅肝脏细胞胀大,肝细胞胞浆中充满大量大小不等的脂肪滴。表明填肥使鹅的肝脏脂肪代谢和血清发生改变。(2)采用SSH技术在填肥组和对照组间共检测到107条差异表达片段,其中未知基因18个,假设性基因26个,与鹅肥肝相关上调表达基因83个,下调表达基因24个。GO聚类分析显示这些差异表达基因主要参与细胞生化过程、信号转导、脂肪合成代谢等生物学过程。(3)荧光实时定量PCR技术检测结果证明,部分代谢相关差异表达基因的表达规律与消减杂交的结果一致。表明SSH技术是检测鹅肥肝形成过程中差异表达基因的有效方法。(4)差异表达基因代谢途径分析(KEGG)表明,在强饲的高能饲料诱导下,脂肪酸合成途径和TG合成途径加强,而糖酵解途径受阻,其中SCD、Elovl-6、ACSL1、NADP-ME等基因参与的不饱和脂肪酸合成途径在肥肝形成过程中发挥极其重要的作用。(本文来源于《扬州大学》期刊2010-05-01）
朱丽慧,徐国庆,段修军,张军,孟和[2]（2009）在《抑制性消减杂交方法筛选鹅肥肝形成中差异表达基因》一文中研究指出实验以朗德鹅为实验素材,采用抑制性消减杂交技术对填肥鹅和未填肥鹅肝脏RNA进行正反两向消减杂交获得鹅肥肝差异表达基因文库,结合斑点印迹杂交筛选差异基因克隆并进行测序分析。斑点杂交筛选后共获得517个差异克隆,经测序分析得到116个差异表达基因。其中鹅肥肝相关上调表达基因88个,下调表达基因28个,未知基因18个,假设性基因26个。差异表达基因GO聚类分析显示这些基因主要参与细胞生化过程、信号转导、脂肪合成代谢等生物学过程。荧光实时定量PCR技术检测结果证明,代谢相关差异表达基因的表达规律与消减杂交的结果基本一致。进一步的代谢途径分析(KEGG)表明,SCD、ELOVL6、ACSL1等基因及其代谢通路在肥肝形成过程中发挥极其重要的作用。(本文来源于《中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集》期刊2009-07-01）
王莹,陈葳,李旭[3]（2008）在《用抑制性消减杂交方法筛选人肾癌相关基因》一文中研究指出目的应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选。方法以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表达基因文库,结合反向Northern斑点印迹杂交,筛选差异基因克隆,并进行测序分析。结果正向和反向文库共包含1200多个阳性克隆,经斑点杂交筛选后,对213个差异克隆进行测序并经BLAST分析,得到144个差异表达基因,与肾癌相关的高表达基因67个,低表达基因77个,其中新EST14个,未知功能基因21个;对测序基因进行聚类分析发现与细胞生长、黏附、凋亡等肿瘤细胞生物学行为相关。结论该文库质量可靠,所筛选出的差异基因和新的基因为进一步筛选肾癌特异性相关基因,绘制肾癌差异基因表达谱,最终阐明肾癌发生、发展、转移机制提供了实验材料和研究靶点。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2008年01期）
蔡应繁,莫剑川,曾宇,任薇薇,苗琛[4]（2003）在《抑制性消减杂交方法克隆棉属突变材料腺体发育相关的cDNAs》一文中研究指出该文采用抑制性消减杂交方法 (SSH)构建了棉属突变材料“湘棉 18”种子萌发过程中腺体发育形成前后的两个不同时期的SSH差减文库 .通过差示筛选及反式Northern检测 ,获得了色素腺体形成时期特异表达或优势表达的cDNA片段 .结果表明 ,这些cDNA所涉及的基因 ,多数是棉属中新发现的 ,它们与发育调控、细胞凋亡、蛋白质合成等密切相关 .(本文来源于《北京林业大学学报》期刊2003年03期）
朱武凌,段芳龄,刘东亮,范秉琳,张玲[5]（2003）在《应用抑制性消减杂交方法克隆人肝细胞癌差异表达基因》一文中研究指出Diatchenko等[1]报道了一种新的快速克隆差异表达基因cDNA的方法,称为抑制性消减杂交(SSH),十分适用于克隆造成某种特殊细胞表型的特异表达基因,例如正常和病变之间的基因表达差异分析。人肝细胞癌(HCC)是我国高发的恶性肿瘤之一,其发生发展与多种基因的突变与表达异常有关。我们应用抑制性消减杂交方法克隆HCC与癌旁非癌组织之间差异(本文来源于《中华肝脏病杂志》期刊2003年03期）
杨希川,郝飞,程波,宋志强,杨卫兵[6]（2002）在《应用抑制性消减杂交方法构建斑秃毛乳头差异表达基因文库》一文中研究指出目的 构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞 (DPC)差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库 ,为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础。方法 应用抑制性消减杂交技术 ,分别从斑秃区DPC及正常头皮DPC提取总mRNA ;依次合成单链及双链cDNA ,分别与 2种不同的接头连接 ,再进行正向和反向的 2次消减杂交及 2次抑制性PCR ;将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库。结果 构建成功具有高消减效率的斑秃区及正常头皮DPCcDNA消减文库 ,文库扩增后得到 12 0个阳性克隆 ,其中 90个克隆含有 10 0～ 5 0 0bp插入片段。结论 应用抑制性消减杂交技术所构建的斑秃区及正常头皮DPCcDNA消减文库 ,为进一步批量筛选、克隆斑秃区及正常头皮DPC特异性表达的基因奠定了基础。(本文来源于《中华医学美学美容杂志》期刊2002年04期）
肖丙秀,郭俊明,赵青[7]（2002）在《抑制性消减杂交方法的建立》一文中研究指出为建立研究基因表达差异的抑制性消减杂交 (SSH)方法 ,以未加诱导剂处理的结肠癌LoVo细胞提取的mRNA为模板合成的cDNA作为驱赶子 (driver) ,联合使用 10 .0 μmol/LATRA和 0 .1μmol/L 1,2 5 - (OH) 2 D3诱导 2d的LoVo细胞提取的mRNA为模板合成的cDNA作为测试子 (tester)进行SSH实验 .结果为 :消减产物与未消减样品 (对照 )在琼脂糖凝胶电泳图谱上明显不同 ,前者可见一些扩增条带 ,其大小范围在 10 0～ 10 0 0bp之间 .本实验说明SSH方法对于识别差异表达的基因具有高效性 .(本文来源于《宁波大学学报(理工版)》期刊2002年01期）
郭俊明,陶莎,周俊宜,庄菁,谢金卫[8]（2001）在《应用抑制性消减杂交方法分析结肠癌相关基因》一文中研究指出目的：应用抑制性消减杂交（suppression substractive hybridization,SSH）方法分析、研究结肠癌相关基因。方法：在联合使用全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid A,TRA）和1,25－二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]诱导大肠癌细胞株LoVo细胞分化的基础上，以大肠癌细胞提取的mRNA为模板合成的cDNA作为测试子，逆转细胞提取的mRNA为模板合成的cDNA作为驱赶子，进行SSH实验，研究LoVo细胞诱导前、后基因表达的差异。结果：首次证明ews基因和htert/hest2基因在大肠癌细胞中有表达，首次报道2个表达序列标签(expressed sequence tags,EST)（基因库登录号分别为AW266488和AW266490）。结论：大肠癌的发生是多基因参与的复杂过程。新EST提示诱导分化由多个基因参与，本文结果为阐明大肠癌的发病机制和诱导分化的机制以及筛选大肠癌候选基因提供了实验依据。(本文来源于《癌症》期刊2001年07期）
抑制性消减杂交方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
实验以朗德鹅为实验素材,采用抑制性消减杂交技术对填肥鹅和未填肥鹅肝脏RNA进行正反两向消减杂交获得鹅肥肝差异表达基因文库,结合斑点印迹杂交筛选差异基因克隆并进行测序分析。斑点杂交筛选后共获得517个差异克隆,经测序分析得到116个差异表达基因。其中鹅肥肝相关上调表达基因88个,下调表达基因28个,未知基因18个,假设性基因26个。差异表达基因GO聚类分析显示这些基因主要参与细胞生化过程、信号转导、脂肪合成代谢等生物学过程。荧光实时定量PCR技术检测结果证明,代谢相关差异表达基因的表达规律与消减杂交的结果基本一致。进一步的代谢途径分析(KEGG)表明,SCD、ELOVL6、ACSL1等基因及其代谢通路在肥肝形成过程中发挥极其重要的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抑制性消减杂交方法论文参考文献
[1].朱丽慧.抑制性消减杂交方法筛选鹅肥肝中差异表达基因[D].扬州大学.2010
[2].朱丽慧,徐国庆,段修军,张军,孟和.抑制性消减杂交方法筛选鹅肥肝形成中差异表达基因[C].中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集.2009
[3].王莹,陈葳,李旭.用抑制性消减杂交方法筛选人肾癌相关基因[J].南方医科大学学报.2008
[4].蔡应繁,莫剑川,曾宇,任薇薇,苗琛.抑制性消减杂交方法克隆棉属突变材料腺体发育相关的cDNAs[J].北京林业大学学报.2003
[5].朱武凌,段芳龄,刘东亮,范秉琳,张玲.应用抑制性消减杂交方法克隆人肝细胞癌差异表达基因[J].中华肝脏病杂志.2003
[6].杨希川,郝飞,程波,宋志强,杨卫兵.应用抑制性消减杂交方法构建斑秃毛乳头差异表达基因文库[J].中华医学美学美容杂志.2002
[7].肖丙秀,郭俊明,赵青.抑制性消减杂交方法的建立[J].宁波大学学报(理工版).2002
[8].郭俊明,陶莎,周俊宜,庄菁,谢金卫.应用抑制性消减杂交方法分析结肠癌相关基因[J].癌症.2001
标签：鹅肥肝; SSH; 荧光定量qRT-PCR; 差异表达基因;