论文题目: 猪繁殖与呼吸道综合征、猪瘟和猪圆环病毒病诊断DNA微阵列的构建及其检测技术研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 肖驰
导师: 文心田
关键词: 微阵列,猪繁殖与呼吸道综合征病毒,猪瘟病毒,猪圆环病毒型,诊断
文献来源: 四川农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究首次应用DNA微阵列技术构建了猪繁殖与呼吸疾病综合症病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪圆环病毒2型（PCV2）检测芯片,建立了PRRS、CSF和PCV2感染基因芯片检测新技术,主要研究内容包括下面三个方面。 1.靶基因克隆、鉴定与分析 对GenBank中报道的PRRSV、CSFV和PCV基因序列进行多重序列对位排列分析（MSA）,应用ArrayDesigner2.0软件针对保守区域设计靶基因。PRRSV和CSFV采用RT-PCR一步法、PCV采用PCR法扩增共获得了15个靶基因片段,用pMD18-T克隆、筛选获得T/PRRS-PS9、T/U1b、T/E6、T/E8、T/C14P9、T/Y11、T/Y12、T/CSFPS5、T/CSF1、T/Npro、T/Erns、T/HCLVP7、T/PCVCQB7、T/PCV2P6和T/PCVT3等15个靶基因重组质粒,经序列测定、MSA分析结果为: 1) PRRS-PS9（基因收录号:AY775134）、U1b（基因收录号:AY775135）、Y11（基因收录号:AY775133）、Y12（基因收录号:AY775136）和C14P9（基因收录号:AY775132）扩增自PRRSV C14-2,分别为PRRSV美洲型5’UTR、ORF1b、ORF6、ORF7、ORF5基因片段,片段大小分别为174bp、301bp、155bp、176bp、468bp;E6和E8扩增自西班牙PRRS疫苗株VP046,为PRRSV欧洲型ORF6和5’UTR基因片段,长度分别为350 bp和191bp。PRRS靶基因与同型毒株的核苷酸序列一致性在90%以上,个别基因高达100%,与异型毒株则在70%以下,其中C14P9靶基因与国外VR2332参考毒株和主要美洲型弱毒疫苗株的核苷酸序列一致性高达99%左右,而与国内多数分离株的序列一致性在85%左右。 2) 靶基因CSFPS5（基因收录号:AY775139）、CSF1（基因收录号:AY775140）、Npro（基因收录号:AY775138）、Erns（基因收录号:AY775137）扩增自猪瘟临床病料、HCLVP7（基因收录号:AY775141）扩增自猪瘟兔化弱毒疫苗,分别为CSFV 3’UTR、5’UTR、Npro、Erns和E2基因片段,长度分别为133 bp、143 bp、293 bp、301 bp和490bp。MSA分析发现CSF靶基因与瘟疫病毒属1、2、3、4型和待定的5型和6型核苷酸序列一致性分别为:CSFPS5,30-50%、80-100%、40-60%、40-50%、48%、48%;CSF1,60-70%、>95%、80%、64%、68.71%、68.54%;Npro,70-75%、85-100%、75%、35-40%、77%;Erns,55-60%、80-100%、30-35%、50-55%、55.94%、57.96%:HCLVP7,60-65%、>90%、40%、60-65%、64.51%、66.55%。
论文目录:
综述一 猪瘟病毒分子生物学及其检测技术研究进展
综述二 猪繁殖与呼吸道综合症病毒分子生物学及其检测技术研究进展
综述三 猪圆环病毒2型病毒分子生物学及其检测技术研究进展
综述四 基因芯片技术及其对动物传染病检测的研究进展
前言
第一章 靶标的克隆、鉴定和分析
1. 材料
2. 方法
3. 结果
4. 讨论
5. 结论
第二章 诊断DNA微阵列的构建
1. 材料
2. 方法
3. 结果
4. 讨论
5. 结论
第三章 PRRS-CSF-PCV2诊断DNA微阵列检测技术研究
1. 材料
2. 方法
3. 结果
4. 讨论
5. 结论
参考文献
致谢
附录
附表1 本文分析时引用PRRSV毒株
附表2 本文分析时引用瘟疫病毒属毒株
附表3 本文分析时引用PCV毒株
彩图
附件1 试验试剂配置
附件2 靶基因测序图
附件3 在读期间论文成果情况
发布时间: 2005-10-27
参考文献
- [1].猪圆环病毒病小鼠动物模型的研究[D]. 邓治邦.湖南农业大学2011
- [2].华东地区猪圆环病毒病流行病学调查与防治技术研究[D]. 史岩.扬州大学2010
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标签：微阵列论文; 猪繁殖与呼吸道综合征病毒论文; 猪瘟病毒论文; 猪圆环病毒型论文; 诊断论文;