论文摘要
谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）是生物体内抗氧化应激酶系的重要成员,是一种含硒蛋白质,它通过清除过氧化氢（H2O2）和有机氢过氧化物（ROOH）,保护机体免受活性氧的损伤或减少活性氧对机体的损伤程度。GPX的缺乏与多种疾病有关。天然的GPX具有不稳定,来源有限,分子量大,易引起人体免疫反应等缺点,极大限制了此酶的开发和应用。因此,许多科学家都开始对该酶的人工模拟物进行研究。我们以GSH的类似物S-2,4-二硝基苯酚-谷胱甘肽丁酯（GSH-S-DNPBu）作为抗原物质,通过三轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,从噬菌体展示人源抗体库中筛选出能与其特异性结合的小分子单链抗体,此单链抗体被展示在噬菌体表面。通过ELISA方法检测噬菌体抗体与抗原结合的特异性,最后挑选出亲和力较高的噬菌体单链抗体。从该噬菌体中提取单链DNA,以单链DNA为模板,用抗体库的公共引物进行PCR扩增,用NcoI和NotI两种酶对PCR产物进行双酶切,获得目的基因片段,再将目的基因片段与用相同酶切的pPelB质粒载体连接,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,然后在适宜条件下用IPTG诱导进行可溶性表达。收集菌体,利用SDS-PAGE和Western blot进行初步鉴定。结果我们成功地在大肠杆菌中表达出了单链抗体。
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标签：谷胱甘肽过氧化物酶论文; 单链抗体论文; 噬菌体展示人源抗体库论文; 大肠杆菌论文; 表达论文;