Kallikrein 6在卵巢癌中的表达、调控及临床意义

论文摘要

【目的】卵巢癌是常见妇科恶性肿瘤之一，由于起病隐匿，缺乏早期诊断的有效指标，晚期治疗效果差，严重威胁妇女健康。目前有关卵巢癌发生的确切机制尚未明确，流行病学研究发现，内分泌因素、遗传因素、不良的营养和饮食习惯等是卵巢肿瘤重要的危险因素。因此，积极借助最新分子生物学技术，从基因水平上探讨卵巢癌的发牛机制及卵巢癌相关基因的功能，寻找有关卵巢癌早期诊断、预后监测的新指标是目前卵巢癌研究中至关重要的课题。KLK基因家族是近来新发现的一类与性激素相关的肿瘤标记家族，KLK6基因是该家族成员之一，编码的蛋白hK6是由223个氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶，具有胰蛋白酶样活性，与卵巢癌关系密切。本课题通过雌激素调控体外培养的卵巢癌细胞株，观察雌激素对KLK6基因以及卵巢癌细胞牛物学性状的影响，以初步探讨KLK6基因在卵巢癌发生发展中的作用及功能；同时通过免疫组化SP法检测KLK6基因编码的蛋白hK6在卵巢癌中的表达及与临床病理特征、预后的关系，探讨其临床意义。【方法】1．四种不同浓度(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7mol／L)的17β-E2作用于体外培养的卵巢癌H08910细胞株72小时后，采用实时荧光定量PCR和流式细胞仪分别检测KLK6 mRNA和蛋白的表达变化，流式细胞仪和MTT法检测调控前后H08910细胞增殖周期和细胞增殖活力的改变，初步探讨KLK6基因的功能及其在卵巢癌发生发展中的作用。2．通过免疫组化SP法检测hK6蛋白在19例良性卵巢上皮瘤、11例交界性卵巢上皮瘤和45例卵巢上皮癌中的表达，以及该蛋白的表达与患者年龄、原发肿瘤大小、组织分型、分化程度、临床分期、淋巴结转移等临床病理特征和病人术后生存状况的关系，探讨其临床意义。【结果】1．不同浓度(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7mol／L)的17β-E2作用72小时后，H08910细胞KLK6 mRNA水平（3.83±0.41、4.14±0.49、6.26±0.38、7.28±1.82）和蛋白水平（10.62±0.35、10.89±0.12、11.88±0.28、12.07±0.15）均明显高于乙醇对照组（P＜0.01）；随着E2浓度增加，各试验组H08910细胞G0／G1期百分率（67.72％、66.98％、66.31％、65.19％）呈下降趋势，S期（17.70％、18.27％、18.55％、19.11％）和G2／M期百分率（14.58％、14.75％、15.14％、15.70％）呈上升趋势；同时，各试验组H08910细胞光吸收度A值（0.7713±0.0151、0.8487±0.0224、0.8577±0.0163、0.8953±0.0310）也逐渐升高，与乙醇对照组（0.4593±0.0638）相比，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。2．hK6蛋白在卵巢良性、交界性及恶性卵巢肿瘤组织中的阳性表达率分别为15.8％，27.3％和60.0％，其在卵巢癌中的阳性表达率明显高于其在良性和交界性肿瘤中的表达，差异有统计学意义（P＜0.01）。hK6的阳性表达与患者的年龄、原发灶大小以及卵巢癌组织学类型无关；中低分化卵巢癌中的阳性表达率（68.4％）高于高分化者（14.3％），差异有统计学意义（P=0.023＜0.05）；卵巢癌晚期（Ⅲ期）的阳性表达率（76.7％）明显高于早期（Ⅰ／Ⅱ期）阳性表达率（26.7％，P=0.001＜0.01）；有淋巴结转移者的阳性表达率（77.8％）明显高于无淋巴结转移者（33.3％，P=0.003＜0.01）；术后3年内复发／转移／死亡的阳性表达率（75.0％）高于术后3年内病情稳定者（42.9％，p=0.028＜0.05）。结论：KLK6基因在卵巢癌细胞株中的表达受雌激素上调，同时促进卵巢癌细胞的增殖，可能是卵巢癌发展的促进因子，为卵巢癌防治提供了新的思路。该基因编码的蛋白hK6在卵巢癌组织中的表达明显高于其在良性和交界性卵巢肿瘤中的表达，且其在晚期、分化差、有淋巴结转移、预后差的卵巢癌中高表达，提示可能是一种新的反映卵巢癌恶性程度和预后的肿瘤标记物。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文符号说明
• 正文
• 前言
• 第一部分 KLK6基因在人卵巢癌细胞株中的表达与调控研究
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 第二部分 hK6蛋白在卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系
• 一、材料与方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 综述 人类组织型Kallikrein基因家族与肿瘤研究进展
• 附录、附图表
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文
• 学位论文评阅及答辩情况表