本文主要研究内容
作者林华（2019）在《大肠杆菌属Nissle1917胞外囊泡蛋白组分析及其对鼠巨噬细胞功能的免疫调控作用》一文中研究指出：大肠杆菌Nissle 1917(EcN)是一种革兰氏阴性益生菌,因其对肠道疾病有显著的缓解效果而被广泛用于临床治疗中。它能够通过其分泌胞外囊泡调节宿主肠上皮细胞的免疫反应。巨噬细胞是固有免疫反应中的重要免疫细胞,然而关于EcN与巨噬细胞互作报道甚少。鉴于此,本试验旨在通过分离EcN的胞外囊泡(EcN_OMVs)探究其对巨噬细胞生物功能的调节作用,并利用蛋白组学技术进一步挖掘影响巨噬细胞功能的潜在免疫信号分子,为EcN在动物肠道中的免疫调节机制提供理论基础。试验包括两部分:(1)首先利用差速离心和梯度密度离心法分离和纯化EcN_OMVs,用激光纳米颗粒分析仪分析其粒径大小及分布,透射电子显微镜观察其形态结构;利用激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞对EcN_OMVs的内在化;用玻璃珠涂板法测定巨噬细胞吞噬病原性大肠杆菌的数量以探究EcN_OMVs对巨噬细胞杀菌能力的影响。然后分别用PBS(对照组)、0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL和20μg/mL EcN_OMVs刺激RAW264.7巨噬细胞16 h。检测细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和NO含量以及乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞裂解液中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性;(2)采用液相色谱-质谱联用技术分析EcN_OMVs蛋白组分;研究结果如下:(1)成功从EcN培养上清中分离纯化出具有磷脂双分子层结构的EcN_OMVs,其粒径范围是50~200 nm,峰值为101.5 nm;(2)EcN_OMVs能够被RAW 264.7细胞所内化,且EcN_OMVs能够在5 h后提高RAW264.7细胞的杀菌能力;与对照组相比,不同浓度EcN_OMVs处理的巨噬细胞的LDH活性没有显著差异(P>0.05);与对照组相比,各浓度EcN_OMVs处理的巨噬细胞分泌NO含量均显著提高(P<0.05),其中,0.1μg/mL EcN_OMVs组NO含量显著低于其他三组;1μg/mL EcN_OMVs组iNOS活性显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,不同浓度的EcN_OMVs处理的细胞产生的炎症因子IL-6和IL-12均显著提高(P<0.05);1μg/mL和10μg/mL EcN_OMVs组均可显著引起促炎症因子IL-1β的含量升高(P<0.05);1μg/mL EcN_OMVs组可以显著提高促炎症因子TNF-α的表达(P<0.05);各浓度EcN_OMVs处理组均可显著提高IL-10的含量(P<0.05)。(3)采用液相色谱-质谱联用技术对EcN_OMVs的蛋白组分进行分析,共鉴定出408种蛋白,发现这些蛋白来自周质间隙(40.69%)、胞质(31.37%)、外膜(10.78%)、内膜(9.31%)和胞外(7.84%)。利用GO二级分类和KEGG通路分析发现,这些蛋白参与益生菌在肠道中的正常生存(envC、FepA、OmpA、碳水化合物过程相关酶蛋白等)、粘附(flgA、flgI和fliC等)和免疫调节(OmpA、OmpF和flgH)等途径。研究结论:EcN能够分泌OMVs作为信号分子的载体,引发RAW 264.7细胞的促炎反应和抗炎反应,调节RAW 264.7细胞生物功能,并且推测此OMVs中携带的鞭毛蛋白和外膜蛋白等与其引起的免疫反应相关。
Abstract
da chang gan jun Nissle 1917(EcN)shi yi chong ge lan shi yin xing yi sheng jun ,yin ji dui chang dao ji bing you xian zhe de huan jie xiao guo er bei an fan yong yu lin chuang zhi liao zhong 。ta neng gou tong guo ji fen bi bao wai nang pao diao jie su zhu chang shang pi xi bao de mian yi fan ying 。ju shi xi bao shi gu you mian yi fan ying zhong de chong yao mian yi xi bao ,ran er guan yu EcNyu ju shi xi bao hu zuo bao dao shen shao 。jian yu ci ,ben shi yan zhi zai tong guo fen li EcNde bao wai nang pao (EcN_OMVs)tan jiu ji dui ju shi xi bao sheng wu gong neng de diao jie zuo yong ,bing li yong dan bai zu xue ji shu jin yi bu wa jue ying xiang ju shi xi bao gong neng de qian zai mian yi xin hao fen zi ,wei EcNzai dong wu chang dao zhong de mian yi diao jie ji zhi di gong li lun ji chu 。shi yan bao gua liang bu fen :(1)shou xian li yong cha su li xin he ti du mi du li xin fa fen li he chun hua EcN_OMVs,yong ji guang na mi ke li fen xi yi fen xi ji li jing da xiao ji fen bu ,tou she dian zi xian wei jing guan cha ji xing tai jie gou ;li yong ji guang gong ju jiao xian wei jing guan cha ju shi xi bao dui EcN_OMVsde nei zai hua ;yong bo li zhu tu ban fa ce ding ju shi xi bao tun shi bing yuan xing da chang gan jun de shu liang yi tan jiu EcN_OMVsdui ju shi xi bao sha jun neng li de ying xiang 。ran hou fen bie yong PBS(dui zhao zu )、0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mLhe 20μg/mL EcN_OMVsci ji RAW264.7ju shi xi bao 16 h。jian ce xi bao shang qing ye zhong TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10he NOhan liang yi ji ru suan tuo qing mei (LDH)huo xing ,xi bao lie jie ye zhong you dao xing yi yang hua dan ge mei (iNOS)huo xing ;(2)cai yong ye xiang se pu -zhi pu lian yong ji shu fen xi EcN_OMVsdan bai zu fen ;yan jiu jie guo ru xia :(1)cheng gong cong EcNpei yang shang qing zhong fen li chun hua chu ju you lin zhi shuang fen zi ceng jie gou de EcN_OMVs,ji li jing fan wei shi 50~200 nm,feng zhi wei 101.5 nm;(2)EcN_OMVsneng gou bei RAW 264.7xi bao suo nei hua ,ju EcN_OMVsneng gou zai 5 hhou di gao RAW264.7xi bao de sha jun neng li ;yu dui zhao zu xiang bi ,bu tong nong du EcN_OMVschu li de ju shi xi bao de LDHhuo xing mei you xian zhe cha yi (P>0.05);yu dui zhao zu xiang bi ,ge nong du EcN_OMVschu li de ju shi xi bao fen bi NOhan liang jun xian zhe di gao (P<0.05),ji zhong ,0.1μg/mL EcN_OMVszu NOhan liang xian zhe di yu ji ta san zu ;1μg/mL EcN_OMVszu iNOShuo xing xian zhe gao yu dui zhao zu (P<0.05);yu dui zhao zu xiang bi ,bu tong nong du de EcN_OMVschu li de xi bao chan sheng de yan zheng yin zi IL-6he IL-12jun xian zhe di gao (P<0.05);1μg/mLhe 10μg/mL EcN_OMVszu jun ke xian zhe yin qi cu yan zheng yin zi IL-1βde han liang sheng gao (P<0.05);1μg/mL EcN_OMVszu ke yi xian zhe di gao cu yan zheng yin zi TNF-αde biao da (P<0.05);ge nong du EcN_OMVschu li zu jun ke xian zhe di gao IL-10de han liang (P<0.05)。(3)cai yong ye xiang se pu -zhi pu lian yong ji shu dui EcN_OMVsde dan bai zu fen jin hang fen xi ,gong jian ding chu 408chong dan bai ,fa xian zhe xie dan bai lai zi zhou zhi jian xi (40.69%)、bao zhi (31.37%)、wai mo (10.78%)、nei mo (9.31%)he bao wai (7.84%)。li yong GOer ji fen lei he KEGGtong lu fen xi fa xian ,zhe xie dan bai can yu yi sheng jun zai chang dao zhong de zheng chang sheng cun (envC、FepA、OmpA、tan shui hua ge wu guo cheng xiang guan mei dan bai deng )、nian fu (flgA、flgIhe fliCdeng )he mian yi diao jie (OmpA、OmpFhe flgH)deng tu jing 。yan jiu jie lun :EcNneng gou fen bi OMVszuo wei xin hao fen zi de zai ti ,yin fa RAW 264.7xi bao de cu yan fan ying he kang yan fan ying ,diao jie RAW 264.7xi bao sheng wu gong neng ,bing ju tui ce ci OMVszhong xie dai de bian mao dan bai he wai mo dan bai deng yu ji yin qi de mian yi fan ying xiang guan 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北农林科技大学的林华，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于大肠杆菌属论文,巨噬细胞论文,生物功能论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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