CD40-CD40L在血管内皮细胞增殖过程中的作用

论文摘要

目的：1.探讨人脐静脉内皮细胞（HUVEC）及巨噬细胞的培养与鉴定方法；2.采用人脐静脉内皮细胞与能表达CD40L的巨噬细胞共同孵育,以及抗体阻滞试验的方法,探讨CD40-CD40L相互作用对内皮细胞释放NO及ICAM-1的影响,试图在细胞和分子水平上探讨动脉粥样硬化病理生理机制,为临床防治提供新的思路。方法：1.采用Ⅰ型胶原酶灌注法收集HUVEC,胰蛋白酶消化传代,Ⅷ因子免。疫组化染色鉴定内皮细胞；2.通过密度梯度离心法从健康成人外周血获得单核细胞,并衍化为巨噬细胞,吞噬试验及CD68免疫组化染色鉴定；3.取第三代HUVEC,观察与巨噬细胞共同孵育,以及采用抗CD40L单克隆抗体阻断CD40L作用后HUVECs的功能变化：（1）倒置显微镜观察细胞形态；（2）MTT法检测细胞存活率；（3）双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定ICAM-1；（4）硝酸还原酶法测血浆NO。结果：1.胶原酶灌注消化法收集细胞,胰蛋白酶消化传代可获得满意的HUVEC,Ⅷ因子染色证实培养细胞为内皮细胞；2.密度梯度离心法能够从人外周血中获取高纯度和活性的巨噬细胞,吞噬试验及CD68染色证实为巨噬细胞；3.与巨噬细胞共孵育组细胞形态发生改变,24小时与48小时细胞存活率明显低于对照组与抗CD40L组（P<0.05）且与巨噬细胞共孵育组存活率48小时细胞低于24小时（P<0.05）。4.与巨噬细胞共孵育组在24小时、48小时ICAM-1浓度显著高于对照组与抗CD40-L组（P<0.05）,且48小时浓度高于24小时（P<0.05）。5.与巨噬细胞共孵育组在24小时、48小时NO浓度显著低于对照组与抗CD40-L组（P<0.05）,且48小时浓度低于24小时（P<0.05）。结论：1胶原酶灌注消化法收集细胞,胰蛋白酶消化传代可获得满意的HUVECⅧ因子染色证实培养细胞为内皮细胞；2密度梯度离心法能够从人外周血中获取高纯度和活性的巨噬细胞,吞噬试验及CD68染色证实为巨噬细胞；3CD40-CD40L信号途径能够促进HUVECs释放ICAM-1,但对NO却起到抑制作用。4阻断CD40-CD401信号系统可能可以延缓血管病变的发生发展。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文对照表
• 前言
• 材料与方法
• 1.材料
• 2
• 3.HUVEC与巨噬细胞膜共孵育
• 4.实验分组:
• 5.倒置显微镜下观察三组细胞的形态变化
• 6.MTT法检测细胞增殖情况
• 7.ICAM-1的测定
• 8.NO的测定
• 9.统计学处理
• 结果
• 讨论
• 1.脐静脉内皮细胞的培养
• 2.巨噬细胞的培养
• 3.CD40-CD40L与血管内皮细胞
• 4.CD40-CD40L与ICAM-1、血管内皮细胞
• 5.CD40-CD40L与NO、血管内皮细胞
• 结论
• 参考文献
• 综述一
• 参考文献
• 综述二
• 参考文献
• 作者简历
• 致谢
• 导师评阅表