痕量指纹DNA的提取及STR基因分型

论文摘要

目的：建立从渗透性和非渗透性载体上提取检验指纹DNA的方法,最大限度地发挥指纹特别是特征点残缺不全的指纹的刑侦作用,为刑侦工作提供科学依据。方法：利用自主研发的汗潜指纹DNA提取液提取痕量指纹DNA,用改进的MDA扩增法扩增,扩增产物应用AmpF/STR（?） IdentifilerTM CR Amplification Kit, PowerPlex（?） 16 System, GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统20A 3种多重STR检测试剂盒进行基因分型检测。结果：5pg模板改进的MDA扩增产物进行16个STR位点分型检测,可获得12个STR位点基因分型结果,而Sigma WGA法仅获4个位点基因分型结果。改良的MDA法扩增汗潜指纹DNA提取液提取非渗透性载体-玻片上指纹DNA,经AmpFlSTR（?） IdentifilerTM PCR Amplification Kit对16个STR位点分型检测,可获得9个STR位点基因分型结果。而5% chelex-100提取汗潜指纹DNA, STR分型只能获得2-3位点基因分型结果。结论：改进的MDA方法能提高痕量DNA样本STR分型检验的灵敏度,但指纹DNA的分型检测中存在等位基因偏差现象,实验方法还有待改进。使用SNP标记代替STR标记可能提高痕量DNA正确检出率。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 研究背景
• 1 基因组多态性
• 1.1 RFLP
• 1.2 STR
• 1.3 SNP
• 2. WGA技术
• 2.1 DOP-PCR
• 2.2 LMP-PCR
• 2.3 PEP和MDA
• 2.4 pWGA
• 3. 指纹DNA研究现状介绍
• 第二章 商业化WGA kit在指纹DNA的基因分型的应用
• 1. 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.2 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 手指脱落细胞检测
• 1.2.2 指纹样品的制备
• 1.2.3 指纹样品的转移
• 1.2.4 汗潜指纹DNA的提取
• 1.2.5 痕量DNA的WGA扩增
• 1.2.6 产物的纯化
• 2. 结果
• 2.1 手指脱落细胞检测
• 2.2 不同浓度梯度DNA-9947A标准品WGA扩增结果
• 2.3 纸张和玻片上指纹DNA扩增结果
• 3. 讨论
• 3.1 汗潜指纹DNA检验原理
• 3.2 渗透性和非渗透性载体指纹DNA提取结果说明
• 第三章 改良MDA扩增方法的建立
• 1. 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.2 主要仪器及软件
• 1.2 改良MDA方法的建立
• 1.2.1 不同引物及引物组合实验
• 1.2.2 酶浓度的影响
• 1.2.3 起始模板浓度的影响
• 1.2.4 温度的影响
• 1.2.5 改良MDA法对指纹DNA的扩增
• 2. 结果
• 2.1 不同引物对MDA扩增效率的影响
• 2.2 酶浓度影响的结果
• 2.3 起始模板浓度影响的结果
• 2.4 温度影响的结果
• 2.5 对指纹DNA扩增的结果
• 3. 讨论
• 第四章 STR基因分型实验
• 1. 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.2 主要仪器及软件
• 1.2 方法
• 1.2.1 口腔拭子DNA的提取
• ?Identifiler^TM PCR Amplification Kit的使用'>1.2.2 AmpFlSTR^?Identifiler^TM PCR Amplification Kit的使用
• ? 16 System试剂盒使用'>1.2.3 PowerPlex^? 16 System试剂盒使用
• TM DNA身份鉴定系统20A试剂盒的使用'>1.2.4 Goldeneye^TMDNA身份鉴定系统20A试剂盒的使用
• 1.2.5 样品的电泳
• 1.2.6 数据分析
• 2. 结果
• 2.1 口腔拭子的STR分型结果
• 2.2 10U phi29酶组和20U phi29酶组MDA扩增产物STR分型结果
• 2.3 不同温度下扩增产物的STR分型结果
• 2.4 改良MDA法和Sigma WGA法扩增不同起始浓度9947A STR分型结果
• 2.5 指纹DNA提取扩增的STR分型结果
• 3. 讨论
• 第四章 总结
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 附录A 攻读硕士期间发表论文目录
• 附录B 空白对照STR基因分型图
• 附录C 志愿者口腔拭子STR基因分型图