论文摘要
目的探讨MMTV及HERV在人乳癌中的检出情况,为进一步研究逆转录病毒在乳腺癌肿瘤形成中的作用及机制提供基础。方法针对MMTV特异序列设计引物,以乳腺肿瘤组织基因组DNA和肿瘤细胞系cDNA为模板,PCR检测相应序列存在情况及检出率。对检出的序列进行克隆及测序,然后与人类基因组序列比对。对测序证实的逆转录元件相关序列进行real time PCR,检测拷贝数与细胞周期的关系。另外将所得HERV-W序列构建入pcmv-flag4质粒,转染细胞检测其表达情况。结果乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系均只能检出与MMTV包膜蛋白（env）序列低度同源片段（40%～50%）。测序证实其为逆转录元件（包括LINEs SINEs HERVs）的相关序列,此序列上游存在LTR（long terminal repeats）和ALU序列,其内均蕴含启动子活性。此序列下游附近有一个miRNA前体茎环结构。此序列在癌巢组织及癌旁组织存在模板量的差异。经real time PCR提示相应序列在S期细胞中存在高拷贝,有转录后再被逆转录成cDNA的过程。另外在乳腺肿瘤组织中存在着可表达病毒序列,与flag融合的蛋白可被抗flag抗体检测。结论i)在所研究的人乳癌组织样本中没有MMTV高度同源序列。ii)肿瘤细胞中HERV逆转录元件活性与肿瘤增值存在相关性,于肿瘤增殖正相关。iii)某些内源性逆转录病毒序列可以在细胞内表达相应蛋白。为进一步研究其与肿瘤关系提供线索。
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