兔眼玻璃体腔植入环孢素A释药系统的药代动力学研究

论文摘要

环孢素A是自真菌培养液中分离获得的中性环状十一肽化合物,具有强烈的选择性免疫抑制活性,自从1978年首次应用于临床以来,目前已广泛用于防治同种器官移植免疫排斥反应以及其它多种自身免疫性疾病。 葡萄膜炎可以累及葡萄膜、视网膜、玻璃体,并多与免疫因素有关,已有的研究表明环孢素A对葡萄膜炎有确切的治疗作用。 本文首先探讨了兔眼葡萄膜炎动物模型的构建,并以分枝结核杆菌H37Ra抗原为免疫原,对新西兰大白兔进行足底免疫、眼内初次免疫、眼内加强免疫构建葡萄膜炎动物模型、并模拟葡萄膜炎复发。文献所载作为分析方法金标准的HPLC在环孢素A血药浓度监测中,其方法最低定量限在基于2mL血液时多在50ng·mL-1,这样的灵敏度不适用于小体积低浓度生物标本兔眼玻璃体中环孢素A的检测,为此本文进一步多角度优化色谱条件,显著提高了检测灵敏度,使该方法满足研究需要。以可生物降解载体—乙交酯-丙交酯-己内酯三元共聚物为缓释辅料制备的环孢素A释药系统植入到兔葡萄膜炎动物模型眼玻璃体腔,前三个月间隔一周随机采集玻璃体标本,其后间隔两周至一个月随机采集玻璃体标本,连续采集八个月;测定环孢素A药物浓度,描绘浓度—时间曲线,并对该释药系统的药代动力学特征进行了初步评价。 论文全方位优化条件,获得了高灵敏度的色谱条件和生物标本前处理方法,首次将生物降解载体制备的环孢素A缓释系统植入到兔葡萄膜炎模型眼玻璃体腔,并对其药代动力学性能进行了初步评价,为环孢素A释药系统的开发与应用奠定了理论基础。

论文目录

• 前言
• 1 动物模型的构建与CsA DDS的植入
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 药品与试剂
• 1.1.2 实验动物
• 1.1.3 实验动物分组
• 1.1.4 主要炎症反应分级标准
• 1.1.5 实验用仪器
• 1.2 实验过程
• 1.2.1 不完全弗氏佐剂的配制
• 1.2.2 免疫原前处理
• 1.2.3 足底免疫
• 1.2.4 玻璃体切除及玻璃体腔植入缓释药物
• 1.2.5 眼内免疫
• 1.3 结果
• 1.3.1 动物模型的制作
• 1.3.2 CsA DDS植入情况
• 1.4 讨论
• 2 色谱条件的优化与分析方法的建立
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 设备与仪器
• 2.1.2 试剂与药品
• 2.1.3 色谱柱
• 2.1.4 标准溶液的配制
• 2.2 色谱条件的优化
• 2.2.1 检测波长的选择
• 2.2.2 柱温的选择
• 2.2.3 色谱柱的选择
• 2.2.4 流动相的选择
• 2.3 方法的建立
• 2.3.1 色谱柱
• 2.3.2 色谱条件
• 2.3.2 样品处理
• 2.3.3 色谱行为
• 2.3.5 标准曲线的绘制
• 2.3.6 回收率实验
• 2.3.7 精密度实验
• 2.3.8 方法的检测限
• 2.4 讨论
• 3 玻璃体药物浓度与残留DDS的分析
• 3.1 玻璃体药物浓度的分析
• 3.1.1 实验材料与药品
• 3.1.2 生物标本采集
• 3.1.3 标本贮存
• 3.1.4 标本测定
• 3.1.5 数据处理
• 3.2 残留DDS的分析
• 3.2.1 标本前处理
• 3.2.2 色谱条件
• 3.2.3 标本溶液的制备
• 3.2.4 色谱行为
• 3.2.5 标准曲线的制备
• 3.2.6 CsA DDS残留测定结果
• 4 局部药动学与制剂释放特点的初步评价
• 4.1 局部药动学初步评价
• 4.2 制剂释放特点初步评价
• 附录
• 结语
• 参考文献
• 在读期间发表论文与申报课题情况
• 致谢