AQP7在围植入期小鼠子宫的表达及功能探讨

论文摘要

水通道蛋白（Aquaporins, AQPs）是一类与水通透性有关的跨膜蛋白家族,它的发现从分子水平上揭示了水快速跨膜转运的基本机制。AQP7隶属于水通道蛋白家族的一个亚型—水甘油通道蛋白,它既可以转运水,也可以转运甘油、尿素等小分子物质。目前越来越多的研究提示水甘油通道蛋白在皮肤、脂肪等多种组织有重要的生理功能,尤其是在皮肤肿瘤发生、肠上皮损伤修复等涉及细胞快速增殖的情况下,其转运的甘油通过代谢产生ATPs为多种组织细胞提供能量。蜕膜化是小鼠胚胎植入的一个关键环节,伴随大量的细胞增殖分化及血管发生,子宫的体积和重量在短短数天内急剧增加,需要消耗大量的能量。鉴于蜕膜化与肿瘤发生在细胞行为和能量代谢等方面具有很大程度的相似性,我们推测AQPs介导的甘油转运在蜕膜化过程中也扮演重要的角色。本研究利用原位杂交、免疫荧光、实时定量PCR等方法,通过体内体外实验研究了AQP7在小鼠围植入期蜕膜化过程中的表达并初步探讨其相关功能。1原位杂交结果显示AQP7 mRNA在妊娠第4天子宫中无明显表达,从第5天起开始在植入位点周围的蜕膜组织表达,随着蜕膜化的进展,其在第6-8天子宫中表达范围逐渐扩大。免疫荧光结果与原位杂交类似,值得注意的是,当AQP7开始在妊娠第5天植入位点周围的蜕膜组织表达时,其在蜕膜细胞局部呈点状表达;而在第6-8天子宫中,其表达模式具有区域特异性:在紧邻植入位点的蜕膜区呈网状表达,而在边缘蜕膜区呈点状表达。在人工诱导蜕膜化的子宫中,AQP7的表达模式与正常妊娠的情况类似,表明AQP7的这种时空特异性表达并不依赖于胚胎的存在,而只依赖于子宫蜕膜化的进程。在体外诱导子宫基质细胞发生蜕膜化的体系中,AQP7阳性表达的细胞随蜕膜化进程逐渐增多。以上结果表明AQP7的表达与蜕膜化进程密切相关。由于AQP7是水甘油通道蛋白,我们检测了妊娠第4-8天小鼠子宫中甘油的含量和甘油激酶的表达。结果显示这段时期子宫中甘油含量和甘油激酶的表达量均随蜕膜化进程逐渐增高,表明这段时期子宫有利用甘油供能的潜力。综上所述,AQP7在围植入期小鼠子宫中呈时空特异性表达,其表达模式与蜕膜化进程密切相关,而这段时期子宫中甘油含量和甘油激酶表达也随蜕膜化进程逐渐增加,提示小鼠子宫蜕膜化很可能利用甘油作为一种潜在的能量物质供能,AQP7则很可能通过介导相应的甘油转运而参与蜕膜化。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1. 材料和方法
• 1.1. 实验试剂与主要仪器
• 1.2. 实验动物及处理
• 1.3. 子宫基质细胞的分离和体外诱导蜕膜化
• 1.4. 原位杂交
• 1.5. Realtime PCR
• 1.6. 间接免疫荧光
• 1.7. 甘油测定
• 1.8. 统计方法
• 2. 结果
• 2.1. AQP7 m RNA 在围植入期小鼠子宫的时空表达
• 2.2. AQP7 蛋白在围植入期小鼠子宫的时空表达
• 2.3. AQP7 这种与蜕膜化进程相关的表达模式不依赖胚胎的存在
• 2.4. AQP7 在体外诱导的蜕膜化细胞中也有表达
• 2.5. 子宫蜕膜化过程中AQP7的表达与甘油积累、甘油激酶表达协同 增高
• 3. 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 研究生期间发表文章