白甲鱼基因组微卫星多态性及同工酶的研究

论文摘要

白甲鱼是我国长江流域干支流中的一种淡水名优经济鱼类。其肉质细嫩鲜美,受到人们的青睐,具有较高的经济价值。但是由于生态环境的影响加之人类的过度捕捞,白甲鱼的野生资源量迅速减少。本实验对白甲鱼的基因组微卫星多态性和同工酶进行研究,为白甲鱼的种质鉴定提供科学依据。本文以白甲鱼的尾鳍为材料,采用酚-氯仿法提取基因组DNA。结果表明采用此方法提取的基因组DNA适合微卫星PCR扩增。利用从岩原鲤中分离出来的微卫星引物对白甲鱼基因组DNA进行扩增,筛选出带型清晰、单一的引物pra20EF5701、pra02EU541506、pra36EU541508、pra67EU541509、pra107EU541514、pra117EU541515作为结果分析。其中引物pra67EU541509和pra117EU541515具有较高的多态性。检测到的等位基因数分别为8和4；观测杂合度和期望杂合度分别为0.75、0.83和0.583、0.736；多态信息含量（PIC）分别为0.766和0.652,属于高度多态性标记。上述结果表明筛选的2个微卫星标记适用于白甲鱼遗传多样性的评估以及种群遗传结构的分析。另外,本文采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳,对白甲鱼的脑、眼、心脏、肝脏、肾脏和肌肉六种组织进行了乳酸脱氢酶（LDH）、酯酶（EST）和苹果酸脱氢酶（MDH）三种同工酶的初步研究。结果表明,不同组织中三种同工酶系统均存在着比较明显的组织特异性。Ldh-AB3和Ldh-B4在脑、眼、心脏和肾脏四个组织中均优势表达,Ldh-A4和Ldh-A3B在肾脏和肌肉中优势表达；EST同工酶在肝脏中酶带条数最多且活性最强,眼睛和肌肉活性最弱；MDH同工酶在肝脏和肾脏中只存在s-MDH型,但活性较强。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1.1 白甲鱼简介
• 1.2 鱼类微卫星DNA标记及其应用
• 1.2.1 微卫星DNA的结构及原理
• 1.2.2 微卫星引物的筛选
• 1.2.3 微卫星DNA标记的应用
• 1.3 同工酶研究及应用
• 1.3.1 同工酶及其研究意义
• 1.3.2 同工酶的检测方法及特点
• 1.3.3 同工酶在鱼类研究中的应用
• 1.4 本论文研究的目的和意义
• 第二章 白甲鱼基因组微卫星多态性的初析
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要仪器设备与试剂
• 2.1.3 微卫星DNA标记的方法步骤
• 2.2 白甲鱼基因组DNA的提取与检测
• 2.2.1 基因组DNA提取步骤
• 2.2.2 基因组DNA的检测
• 2.3 微卫星PCR扩增及产物检测
• 2.3.1 微卫星引物的选择与来源
• 2.3.2 微卫星PCR扩增
• 2.3.3 非荧光引物PCR扩增产物检测
• 2.3.4 荧光引物的合成
• 2.3.5 荧光引物PCR扩增
• 2.3.6 多态性检测
• 2.4 结果
• 2.4.1 样品DNA的提取
• 2.4.2 PCR产物的电泳检测
• 2.4.3 基因扫描结果
• 2.4.4 数据处理结果
• 2.5 讨论与分析
• 2.5.1 两个微卫星位点在白甲鱼群体中的多态性分析
• 2.5.2 影响基因组多态性分析结果的因素
• 2.5.3 应用微卫星DNA技术分析白甲鱼基因多样性的可行性
• 第三章 白甲鱼同工酶的组织特异性研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 实验用鱼
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 实验仪器
• 3.1.4 主要试剂的配制
• 3.1.5 步骤与方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 白甲鱼LDH、EST和MDH三种同工酶的检测结果
• 3.2.2 白甲鱼的同工酶组织分布情况
• 3.3 讨论分析
• 3.3.1 白甲鱼同工酶的组织特异性
• 3.3.2 白甲鱼3种同工酶组织表达特异性的生理意义
• 3.3.3 白甲鱼同工酶对于种质鉴定的意义
• 3.3.4 样品保存
• 3.3.5 组织的筛选
• 3.3.6 可能影响同工酶结果分析的因素
• 第四章 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢