辣椒疫霉菌生理小种及其抗性研究

论文摘要

收集了贵州、四川、广东和青海的省的辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leon)分离物,对其进行生理小种鉴定;将不同生理小种的疫霉菌接种抗性不同的辣椒品种,对供试品种接种后保护酶活性和丙二醛含量进行研究,探讨其变化规律;以不同的辣椒材料作为试材,研究辣椒对疫病抗性分子鉴定技术,所得结果如下:1.利用一套鉴别寄主,通过常规抗病性鉴定技术,将来自不同省份的辣椒疫霉菌分离物进行生理小种鉴定,结果表明:来自贵州的疫霉菌分离物P10属于生理小种1(Race 1),来自青海的分离物P3属于生理小种2(Race 2),来自广东的分离物ZLT0566属于生理小种3(Race 3),来自四川的分离物P15和P16属于同一新的生理小种。2.以疫霉菌生理小种2和生理小种3分别接种辣椒品种EC(感病)、AA22(抗病)和AA5(高抗),对其过氧化物酶和过氧化氢酶活性以及丙二醛含量进行测定,结果表明:接种病原菌后96h内POD活性表现为一直升高,并在96h处出现一个峰值,之后开始下降。在峰值处,以病原菌接种的处理POD活性明显高于对照的,但两个生理小种疫霉菌接种的处理间POD活性差异不显著;供试品种间POD活性有显著差异,抗病品种的明显高于感病品种的。3.接种后144h内,供试品种的CAT活性总体呈上升趋势,感病品种和抗病品种的变化趋势不尽相同,在144h处接种疫霉菌的处理明显高于对照,但两个生理小种疫霉菌接种的处理间CAT活性差异不显著,供试品种之间的CAT活性差异显著,高抗品种CAT活性明显高于感病品种的。4.接种疫霉菌后,高抗品种和感病品种中丙二醛含量变化趋势为先下降后上升,抗病品种丙二醛含量变化趋势与前两者相反。5.根据辣椒对疫病抗病机制的研究,结果认为:POD活性可作为辣椒抗病性的生理指标;CAT活性和丙二醛含量不可作为辣椒疫病抗病性生理生化指标。以上三者皆不能作为划分疫霉菌生理小种的间接指标。6.根据辣椒疫霉菌(P. capsici)核糖体(ribosome)基因及其转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列设计两对引物,确定其中一对用于检测辣椒植株中的疫霉菌。将生理小种3(Race 3)接种不同的辣椒品种,并设置不同的采样时间和部位,提取辣椒基因组和侵染到植株中疫霉菌的DNA,扩增后者的rDNA及其ITS序列。试验表明,在接种后24h和48h不能从辣椒叶片中检测到疫霉菌,而接种后24h可从感病辣椒品种茎中检测到。接种后48h均能从感病、抗病辣椒品种的茎中检测到疫霉菌,并且感病品种中疫霉菌的DNA的扩增量为100ng,抗病品种中的为20ng,前者是后者的5倍;辣椒品种N3中疫霉菌的DNA扩增量为77ng,介于感病和抗病品种之间,更接近前者,因此该品种是感病的。这与常规抗病性鉴定的结果一致。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 分布与危害
• 1.2 症状
• 1.3 传播途径及发病条件
• 1.4 病原菌研究概况
• 1.4.1 形态特征
• 1.4.2 生物学特性
• 1.4.3 P. capsici 的交配型
• 1.4.4 生理分化
• 1.6 辣椒抗性的研究进展
• 1.6.1 抗病性鉴定方法研究
• 1.6.2 抗性遗传规律
• 1.6.3 辣椒对疫病的抗性机制
• 1.7 国内外研究现状及展望
• 1.7.1 国外抗病育种的现状
• 1.7.2 我国的抗病育种现状
• 1.7.3 研究展望
• 1.8 本研究的目的与意义
• 第二章 辣椒疫霉菌的生理小种鉴定
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试菌种
• 2.1.2 辣椒材料
• 2.1.3 培养基
• 2.2 方法
• 2.2.1 菌种的培养和鉴定
• 2.2.2 菌种的复壮
• 2.2.3 抗病性鉴定
• 2.2.4 疫霉菌生理小种鉴定
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 病原菌形态特征
• 2.3.2 发病症状
• 2.3.3 抗病性鉴定的结果
• 2.3.4 疫霉菌生理小种鉴定结果
• 2.4 讨论
• 第三章 辣椒疫病抗病机制的研究
• 3.1 材料
• 3.1.1 供试菌种
• 3.1.2 供试材料
• 3.1.3 化学药品
• 3.1.4 主要仪器
• 3.2 方法
• 3.2.1 接种及采样
• 3.2.2 粗酶液提取
• 3.2.3 过氧化物酶（POD）的测定
• 3.2.4 过氧化氢酶（CAT）的测定
• 3.2.5 丙二醛含量的测定
• 3.3 结果
• 3.3.1 接种后POD 活性的变化
• 3.3.2 接种后CAT 活性变化
• 3.3.3 接种后丙二醛含量的变化
• 3.4 讨论
• 第四章 辣椒疫病抗病性分子鉴定技术研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 主要仪器设备
• 4.1.3 所用试剂
• 4.1.4 PCR 引物
• 4.1.5 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 不同引物的比较
• 4.2.2 不同采样部位和感染时间的PCR 结果比较
• 4.2.3 不同稀释倍数模板的PCR 检测结果
• 4.2.4 辣椒品种N3 的抗病性分子鉴定结果
• 4.3 讨论
• 第五章 结论
• 5.1 辣椒疫霉菌生理小种鉴定
• 5.2 辣椒对疫病的抗性机制研究
• 5.3 辣椒抗性分子鉴定技术研究
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介