紫苏高产迷迭香酸悬浮细胞的培养条件优化

论文摘要

本实验以紫苏外植体作为研究材料,以建立并且优化高产迷迭香酸的紫苏细胞悬浮体系为目的,分别从紫苏外植体的消毒,愈伤组织的诱导,细胞悬浮体系的建立以及悬浮培养条件的优化等方面进行了研究。其研究结果如下：（1）分别以紫苏叶片、茎段、子叶为外植体,采用0.1%升汞溶液和2%次氯酸钠溶液以不同处理时间对外植体进行消毒,探讨不同处理条件对外植体污染率和诱导率的影响。结果表明,综合考虑紫苏叶片,茎段,子叶的污染率与诱导率,选取紫苏的叶片进行愈伤组织的诱导,先用75%乙醇处理30S,再用0.1%升汞溶液处理7min,此时污染率为5%,诱导率为80.7%。（2）分别向B5、MS两种基本培养基中添加不同浓度的激素组合,通过正交实验,研究不同培养基以及激素浓度对紫苏叶片愈伤组织诱导率的影响。综合考虑愈伤组织的诱导率以及愈伤组织的生长状况,可以得出,紫苏的叶片诱导愈伤组织的最优培养基为B5培养基,添加激素为2,4-D1.0mg/L, KT0.4mg/L,6-BA1.0mg/L, NAA1.5mg/L。（3）以悬浮细胞中迷迭香酸含量为最终考察目标,通过单因素实验以及正交实验表明,紫苏悬浮细胞较好培养体系为B5液体培养基,pH6.0,蔗糖浓度4.0%,肌醇浓度150mg/L,6-BA2.0mg/L,2,4-D2.0mg/L, KT0.4mg/L, NAA1.5mg/L。（4）通过高效液相色谱测定紫苏外植体,愈伤组织以及悬浮细胞中迷迭香酸的含量,可以得出叶片中含量为0.25%,茎中含量为0.72%,愈伤组织中含量为3.85%,悬浮细胞中含量（干重）为15.8mg/g～26.1mg/g。与外植体中的含量相比,有了显著的提高。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 紫苏的研究概况
• 1.1.1 紫苏的起源与分布
• 1.1.2 紫苏属植物的分类与植物学性状
• 1.1.3 紫苏的营养成分
• 1.1.4 紫苏的药理学作用
• 1.1.5 紫苏的开发前景
• 1.2 迷迭香酸的研究概况
• 1.2.1 迷迭香酸的性质
• 1.2.2 迷迭香酸的来源
• 1.2.3 迷迭香酸的定量分析方法
• 1.2.4 迷迭香酸的生物活性
• 1.2.5 迷迭香酸在食品工业中的应用前景
• 1.3 次生代谢产物
• 1.3.1 次生代谢产物的概述
• 1.3.2 次生代谢产物的研究历史及现状
• 1.3.3 合成次生代谢产物的生物技术途径
• 1.3.4 植物细胞悬浮培养方法
• 1.3.5 悬浮细胞培养的同步化
• 1.3.6 植物细胞培养悬浮培养条件的优化
• 1.3.7 植物细胞培养应用前景
• 1.4 本课题的研究意义及研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验试剂
• 2.3 实验仪器与设备
• 2.4 紫苏愈伤组织的诱导
• 2.4.1 紫苏外植体的处理
• 2.4.2 紫苏叶片愈伤组织的诱导
• 2.4.3 紫苏愈伤组织生长情况
• 2.5 紫苏悬浮细胞的培养
• 2.5.1 单因素实验的设计
• 2.5.2 正交实验的设计
• 2.6 悬浮细胞生长特性的测定
• 2.7 迷迭香酸含量的测定
• 2.7.1 迷迭香酸标准曲线的测定
• 2.7.2 迷迭香酸的提取及测定
• 3 结果与讨论
• 3.1 采用不同消毒方法处理紫苏外植体的效果比较
• 3.1.1 对紫苏叶片的处理效果
• 3.1.2 对紫苏茎段的处理效果
• 3.1.3 对紫苏子叶的处理效果
• 3.2 不同浓度的激素组合对紫苏叶片愈伤组织诱导的影响
• 3.2.1 B5培养基中不同浓度的激素组合对愈伤组织诱导率的影响
• 3.2.2 MS培养基中不同浓度的激素组合对愈伤组织诱导率的影响
• 3.2.3 不同激素组合对于愈伤组织生长状况的影响
• 3.3 愈伤组织生长曲线及迷迭香酸含量变化
• 3.3.1 愈伤组织的生长曲线
• 3.3.2 愈伤组织迷迭香酸含量变化
• 3.4 迷迭香酸的测定
• 3.4.1 迷迭香酸标准曲线
• 3.4.2 紫苏外植体与愈伤组织中迷迭香酸含量比较
• 3.5 紫苏愈伤组织的悬浮培养
• 3.5.1 紫苏细胞悬浮培养的生长曲线
• 3.5.2 单因素实验
• 3.5.3 正交实验优化
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况
• 8 致谢