季节对牛卵母细胞体外成熟和体细胞克隆胚胎发育能力的影响

论文摘要

在研究牛体细胞核移植过程中,利用从屠宰场屠宰后的牛卵巢可以获得相对充足的卵母细胞。屠宰场的牛来源不同,受各种因素影响较多,而武汉地区夏季湿热时间长,对牛的繁殖功能有很大影响。本研究分析了在不同季节下的牛卵母细胞回收数量、体外成熟率的变化及生产孤雌胚胎、体细胞核移植胚胎体外发育能力的变化。鉴定体外胚胎质量在理论及临床上都有很重要的意义,本研究以前人报道的方法为基础,结合本实验室的实际情况和前人探索过的经验,完善了区分染色鉴定体外胚胎质量的方法,为进一步提高胚胎质量奠定了基础。主要的研究结果如下：1.季节对牛卵母细胞体外成熟及体外胚胎发育能力的影响在该实验中,从屠宰场获得的黄牛卵巢,通过抽吸法回收卵母细胞,在成熟培养液中培养22-24h,然后对成熟的卵母细胞分为两部分,一部分直接孤雌激活然后进行体外培养,另一部分进行核移植、激活以及胚胎的体外培养。通过在四个季节进行的实验之间的对比,可以看出：春季在卵母细胞回收数量、卵母细胞体外成熟率、孤雌胚胎体外发育能力及体细胞克隆胚胎体外发育能力等各方面显著高于夏季,与其他组相比也有部分显著差异,适宜进行牛体外胚胎的生产。2.牛SCNT胚胎移植的初步结果在本实验中,首先在牛场对牛做同期发情处理,然后将实验室培养6-8天发育至桑葚胚或囊胚的SCNT胚胎移植至发情6-8天的母牛体内。牛SCNT胚胎移植效率-直很低,在本实验中,30天不返情的占36.36%,60天不返情的占18.18%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 牛体细胞核移植研究进展
• 1.1 哺乳体细胞克隆简介
• 1.1.1 定义、原理及一般操作程序
• 1.1.2 哺乳动物体细胞克隆研究的优点及不足
• 1.1.3 哺乳动物体细胞克隆技术的研究进展
• 1.2 影响牛体细胞克隆效率的相关因素
• 1.3 全细胞胞质内注射法生产体细胞克隆动物研究进展
• 1.4 卵母细胞的体外成熟
• 1.4.1 卵母细胞的生长过程
• 1.4.2 卵母细胞体外成熟的特征
• 1.4.3 影响卵母细胞体外成熟的因素
• 1.5 SCNT胚胎移植研究进展
• 2 研究目的
• 第二章 季节对牛卵母细胞体外成熟及体外胚胎发育能力的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 主要实验设备
• 1.1.2 主要试剂和药品
• 1.1.3 试验工作液
• 1.1.4 显微操作针的制备
• 1.1.4.1 去核/注核针的制备
• 1.1.4.2 固定针的制备
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 卵巢的获得
• 1.2.2 卵母细胞的收集
• 1.2.3 卵母细胞的体外成熟培养
• 1.2.4 共培养颗粒细胞单层制备
• 1.2.5 供体的制备
• 1.2.6 卵母细胞的去核
• 1.2.7 体细胞核移植重构胚的构建
• 1.2.8 重构胚及孤雌胚的激活
• 1.2.9 胚胎共培养
• 1.2.10 胚胎移植
• 2 试验设计
• 2.1 不同季节对牛卵母细胞体外成熟和核移植后胚胎发育的影响及胚胎移植初探
• 3 数据统计
• 4 结果与分析
• 4.1 不同季节对牛卵母细胞体外成熟和核移植后胚胎发育的影响
• 5 讨论
• 6 小结
• 参考文献
• 附表
• 附图
• 致谢