A型肉毒毒素对神经和肌肉影响的效价研究

论文摘要

A型肉毒毒素（botulinum toxinA,BTXA）是由厌氧性细菌肉毒梭菌产生的一种神经毒素。目前市场上使用的A型肉毒毒素主要有三种:Botox（美国Allergan公司生产）、Dysport（英国Speywood公司生产）和衡力（我国兰州生物制品研究所生产）。自90年代初,Carruthers将Botox应用于减轻面部皱纹,并取得了独特的疗效,从此在面部年轻化方面得到迅速发展。A型肉毒毒素能选择性作用于外周胆碱能神经的神经肌肉接头处,抑制突触前膜释放乙酰胆碱（Ach）,阻断神经递质的传递,从而引起肌肉的松弛性麻痹。临床上BTXA肌肉注射后,12-72h肌肉出现化学去神经作用（chemodenervation）,此种肌松效应可保持3-6个月,随后回复肌肉原有功能。1997年,我国兰州生物制品研究所生产的A型肉毒毒素一“衡力”正式投放市场（97卫药准字（兰）S-01号）,并规定:BTXA需在-20～-5℃冰箱避光保存,生理盐水稀释后必须于4小时以内用完。由于小剂量的BTXA即可产生巨大的效应,故用于美容注射的BTXA一般为25u左右,属微量水平。由于该产品十分昂贵,因此,国产BTXA将原有100u/瓶单一规格改装为100u/瓶与50u/瓶两种规格。即便如此,仍会有较多的BTXA被丢弃,造成很大浪费,处理不当更会污染环境。剩余的BTXA是否可以保存一段时间后继续使用?现今国外已有不少针对储存BTXA的研究,有些研究结果证实了储存一定时间的BTXA,其效价、作用时间及活性等较比新鲜配置的BTXA,二者无明显差异;但是,另有一些研究报道了储存的BTXA的效价明显低于新鲜BTXA。上述研究多是从药理试验方面的影响,几乎没有针对神经、肌肉直接作用点方面的研究。储存的BTXA的效价和作用时间是否受到影响值得进一步深入研究。因此,本课题针对这方面在动物身上进行实验,研究新鲜和储存BTXA对神经肌肉超微结构的影响,探讨A型肉毒毒素对神经和肌肉影响的效价研究。研究目的本研究通过注射新鲜及储存BTXA,观察其对新西兰白兔耳下垂的大体改变、相应神经及肌肉超微结构的变化,并对上述两种BTXA效价、活性和作用持续时间进行对照研究,以期为今后BTXA的临床应用提供实验依据。研究方法一.实验分组:新西兰白兔27只,随机分9组（n=3）,第1组为对照组,余8组为实验组。各组动物均取右耳注射,左耳为正常参照。对照组注射0.05ml生理盐水,实验各组均注射相同剂量BTXA 0.05ml（2.5u）。BTXA分新鲜配制后即刻使用及配制后储存一定时期使用,储存时间依次为1、2、3周二.利用大体观察新鲜及储存BTXA注射后新西兰白兔耳下垂的程度并进行比较,兔耳位置分级共分为3级,第1级即兔耳完全竖直,两侧对称;第2级即兔耳部分下垂,与同侧颅骨成角＞60°;第3级即兔耳明显下垂,与同侧颅骨成角＜60°。三、超微结构观察:利用透射电镜观察新鲜及储存BTXA注射后第5天及第12周耳前肌神经及肌肉的超微结构变化。研究结果一.大体观察结果:新鲜BTXA和储存3周内BTXA均使注射右耳明显下垂,下垂等级呈第3级;但随储存时间的延长,兔耳下垂的时间越短。二.透射电子显微镜观察结果:（1）肌肉超微结构改变:在注射后早期（第5天）,新鲜及储存的BTXA对肌肉的影响无显著性差异;在注射后晚期（第12周）,新鲜及储存1至2周的BTXA比较,两者造成的肌肉萎缩程度无显著性差异,但储存3周的BTXA造成的肌肉变性程度比储存1至2周的BTXA轻。（2）神经超微结构改变:在注射后早期（第5天）,新鲜及储存BTXA对神经均产生了显著的影响;在注射后晚期（第12周）,新鲜及储存1至2周的BTXA比较,两者造成的神经萎缩程度无显著性差异,但储存3周的BTXA造成的神经变性程度比储存1至2周的BTXA轻。研究结论储存1至2周的BTXA与新鲜BTXA比较,两者效价基本相同,但储存3周的BTXA效价下降显著。并且,新鲜BTXA及储存1至2周的BTXA对神经肌肉的影响时间较储存3周的BTXA更持久。因此本实验建议临床上储存BTXA的时间不超过2周。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 前言
• A型肉毒毒素的动物实验研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 全文小结
• 文献综述
• 参考文献
• 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明
• 致谢