能量限制对肉鸡脂肪沉积效应研究及鸡Lipin1基因的克隆分析

论文摘要

本研究通过对饲料量和能量水平的限制,探讨限饲对哈博德肉仔鸡生长、免疫器官以及血液生化指标的影响。试验选用健康哈博德肉鸡250只,通过对肉鸡采用几种不同的限饲处理（自由采食;能量限制;料量限制）,对比观察了不同的限饲方法对肉鸡的生长性状、免疫器官指数、屠体指标以及血液生化指标的影响。研究结果表明,限饲组的日增重、饲料转化率、各周龄体重、全净膛率和腹脂率显著低于自由采食组（p＜0.05）;能量限制组在脾脏指数方面显著高于自由采食组（p＜0.05）;自由采食组、能量限制组和料量限制组尿素氮无显著性差异,然而三个组之间尿酸却存在显著性差异（p＜0.05）。自由组和限制组的血液葡萄糖无显著性差异,限制组之间也无显著性差异,而自由采食组显著低于料量限制组（p＜0.05）。三个组在总胆固醇、三酯酰甘油以及高密度脂蛋白具有相同的差异显著性,即自由采食组和料量限制组都显著高于能量限制组（p＜0.05）,而自由采食组和料量限制组却无显著性差异。自由采食组和能量限制组的生长激素无显著性差异,而两者显著高于料量限制组（p＜0.05）。限饲可以减少腹脂的沉积,提高脾脏指数,提高机体对蛋白质、氨基酸的利用效率,提高机体脂类代谢,而且能量限制的效果优于料量限制。另外,为研究基因对脂肪沉积的调控,探讨脂肪相关基因的信息,本试验选用丝毛乌骨鸡为研究对象,运用分子克隆技术,对鸡脂肪相关基因Lipin1进行克隆,测序,并对基因和基因推导的氨基酸序列进行分析。为下一步研究鸡Lipin1基因多态性和脂肪相关性及Lipin1基因表达、调控奠定了基础。试验结果如下:根据GenBank上搜索到的与人、鼠Lipin1高度同源的鸡预测基因序列XM419957设计七对引物进行扩增验证.测序结果显示鸡Lipin1基因序列与预测序列基本一致。鸡Lipin1长度约为2709bp,编码902个氨基酸残基。将测定的序列结果进行比对,运用DNAman分析软件对实验所得目的基因片段序列进行分析,结果显示:鸡与狗、鸭嘴兽、小鼠、人、大鼠Lipin1基因核苷酸编码序列同源性分别为71.52%、75.34%、75.48%、76.05%、71.60%。推导氨基酸序列的同源性分别为79.6%、78.1%、79.0%、79.3%、79.4%,并分别采用不同物种Lipin1基因的编码序列和预测氨基酸序列进行物种的系统进化和同源树分析。通过和其它品种的序列比较发现七个多态位点导致相应位点氨基酸的改变;此外,发现1127-1138处的一个12bp（CTGCTTGCTCAG）缺失。

论文目录

• 致谢
• 中文摘要
• 第一部分 文献综述
• 1 日粮因素
• 2 遗传因素
• 第二部分 能量限制对肉鸡生长、屠体及血液生化指标的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 试验日粮
• 1.2 方法
• 1.2.1 饲养管理
• 1.2.2 生长性能
• 1.2.3 屠体性能
• 1.2.4 血液的收集与测定
• 1.2.5 统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 限饲对肉鸡生长性能的影响
• 2.2 限饲对肉鸡屠体性能的影响
• 2.3 限饲对肉鸡血液生化指标的影响
• 3 讨论
• 第三部分 鸡Lipin1基因克隆及分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 试验仪器
• 1.1.3 试验试剂
• 1.1.4 主要试剂盒
• 1.1.5 主要生物学软件及数据
• 1.2 方法
• 1.2.1 引物设计
• 1.2.2 组织RNA的提取
• 1.2.3 反转录
• 1.2.4 CDNA的扩增
• 1.2.5 RT-PCR扩增程序
• 1.2.6 胶回收和测序
• 2 结果与分析
• 2.1 鸡Lipin1基因编码序列的克隆
• 2.1.1 组织总RNA的提取
• 2.1.2 RT-PCR扩增
• 2.1.3 测序结果
• 2.1.4 Lipin1基因核苷酸序列同源性分析
• 2.1.5 Lipin1基因不同物种氨基酸同源性分析
• 2.1.6 Lipin1多态性分析
• 3 讨论与结析
• 3.1 关于PCR引物的设计
• 3.2 扩增和测序
• 3.3 Lipin1基因序列分析
• 3.4 Lipin1基因推导氨基酸序列分析
• 3.5 Lipin1基因多态性分析
• 4 结论
• 参考文献
• 英文摘要