本文主要研究内容
作者林怡晨（2019）在《蓝圆鲹ISP分离蛋白凝胶劣化内在机理及应用研究》一文中研究指出：以福建大宗低值鱼类蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)为对象,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline-aided protein isolate,API/KPI),并对其凝胶劣化机理进行研究。结果表明,经条件优化后API与KPI的回收率分别为65.0%与84.6%,显著高于传统漂洗蛋白(得率:54.0%,主要蛋白为:肌原纤维蛋白myofibrillar proteins,MP),且分离蛋白的脂肪与灰分含量明显低于全肉蛋白(total protein,TP)。质构与流变学结果显示,TP、MP与KPI在50-55?C会发生明显的凝胶劣化现象,60?C以上则呈现出凝胶化趋势,而API无明显变化。将TP、API、KPI在50?C孵育,并观察其自身降解情况,结果显示,TP和KPI组的肌球蛋白与原肌球蛋白的自身降解最强烈。TCA可溶性肽分析上清中的蛋白酶活性,发现KPI中保留了TP大部分的酶活力,其最适pH与温度分别为pH 9.0与60?C。抑制剂结果显示,TP和KPI上清中的蛋白酶都能被丝氨酸蛋白酶抑制剂强烈抑制,暗示其中含有丝氨酸蛋白酶家族的蛋白酶。基于以上结果,通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose等一系列柱层析从KPI中分离纯化出一种水溶性丝氨酸蛋白酶。SDS-PAGE和肌原纤维酶谱结果显示该酶的分子量约为70kDa左右。荧光底物分析结果显示该酶能特异的水解丝氨酸家族的底物Boc-Leu-Gly-Arg-MCA。利用荧光底物测得其最适温度与最适pH分别为50?C与pH 9.0。抑制剂实验表明该酶能被丝氨酸蛋白酶类型抑制剂强烈抑制,且部分地被胃蛋白酶及组织蛋白酶抑制剂所抑制。此外,金属螯合剂EDTA对酶活有部分抑制作用,推测可能是由于其活性中心的金属离子被螯合所致。以上结果表明,该酶属于丝氨酸蛋白酶,且很有可能与蓝圆鲹碱性分离蛋白的凝胶劣化现象有关。为了阐明分离蛋白的凝胶形成机制,提取蓝圆鲹肌肉中的肌球蛋白对其进行酸(AM)/碱(KM)pH调节,并研究其理化、构象以及凝胶特性相对于天然肌球蛋白(NM)的变化。AM在40?C孵育后溶解度最低而浊度最高,表明经过酸处理的肌球蛋白容易发生变性和聚集。圆二色谱结果显示酸碱处理会使肌球蛋白的二级结构发生变化,当pH调回中性时,KM相对AM更接近于天然状态。流变学分析结果表明,AM在加热过程中储能模量没有发生显著性变化,表明酸处理使其肌球蛋白构象发生不可逆的变化,引起强烈的变性和聚集现象,最终导致了凝胶能力丧失。这一结果也侧面说明碱法制备蓝圆鲹分离蛋白相对更为可行。为了实现在蓝圆鲹碱分离蛋白的工业化应用,添加了不同比例的大豆分离蛋白抑制其内源性蛋白酶的活力避免凝胶劣化。结果发现,1%的大豆分离蛋白可有效抑制内源性蛋白酶对肌球蛋白重链的降解,且提高鱼糜的凝胶强度。后续在碱分离蛋白添加葡萄糖酸内酯(glucono-δ-lactone,GDL)和谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TG),制备出一款水分含量高,凝胶强度低适合咀嚼吞咽困难的人群食用的软凝胶鱼糜制品。结果表明2%GDL和1%TG的添加均能促使其发生凝胶化,其中GDL凝胶强度要高于TG组,呈现出更高的硬度,白度以及更为致密的凝胶网络结构。化学键和SDS-PAGE结果表明,GDL能够提高蛋白的疏水性并且促进二硫键的形成,而TG能够促进肌球蛋白的交联,形成大分子聚合物,从而促进蛋白凝胶的形成。
Abstract
yi fu jian da zong di zhi yu lei lan yuan can (Decapterus maruadsi)wei dui xiang ,cai yong suan /jian rong jie -deng dian dian chen dian fa (isoelectric solubilization/precipitation,ISP)zhi bei lan yuan can ji rou fen li dan bai (acid/alkaline-aided protein isolate,API/KPI),bing dui ji ning jiao lie hua ji li jin hang yan jiu 。jie guo biao ming ,jing tiao jian you hua hou APIyu KPIde hui shou lv fen bie wei 65.0%yu 84.6%,xian zhe gao yu chuan tong piao xi dan bai (de lv :54.0%,zhu yao dan bai wei :ji yuan qian wei dan bai myofibrillar proteins,MP),ju fen li dan bai de zhi fang yu hui fen han liang ming xian di yu quan rou dan bai (total protein,TP)。zhi gou yu liu bian xue jie guo xian shi ,TP、MPyu KPIzai 50-55?Chui fa sheng ming xian de ning jiao lie hua xian xiang ,60?Cyi shang ze cheng xian chu ning jiao hua qu shi ,er APImo ming xian bian hua 。jiang TP、API、KPIzai 50?Cfu yo ,bing guan cha ji zi shen jiang jie qing kuang ,jie guo xian shi ,TPhe KPIzu de ji qiu dan bai yu yuan ji qiu dan bai de zi shen jiang jie zui jiang lie 。TCAke rong xing tai fen xi shang qing zhong de dan bai mei huo xing ,fa xian KPIzhong bao liu le TPda bu fen de mei huo li ,ji zui kuo pHyu wen du fen bie wei pH 9.0yu 60?C。yi zhi ji jie guo xian shi ,TPhe KPIshang qing zhong de dan bai mei dou neng bei si an suan dan bai mei yi zhi ji jiang lie yi zhi ,an shi ji zhong han you si an suan dan bai mei jia zu de dan bai mei 。ji yu yi shang jie guo ,tong guo liu suan an yan xi 、DEAE-Sepharosedeng yi ji lie zhu ceng xi cong KPIzhong fen li chun hua chu yi chong shui rong xing si an suan dan bai mei 。SDS-PAGEhe ji yuan qian wei mei pu jie guo xian shi gai mei de fen zi liang yao wei 70kDazuo you 。ying guang de wu fen xi jie guo xian shi gai mei neng te yi de shui jie si an suan jia zu de de wu Boc-Leu-Gly-Arg-MCA。li yong ying guang de wu ce de ji zui kuo wen du yu zui kuo pHfen bie wei 50?Cyu pH 9.0。yi zhi ji shi yan biao ming gai mei neng bei si an suan dan bai mei lei xing yi zhi ji jiang lie yi zhi ,ju bu fen de bei wei dan bai mei ji zu zhi dan bai mei yi zhi ji suo yi zhi 。ci wai ,jin shu ao ge ji EDTAdui mei huo you bu fen yi zhi zuo yong ,tui ce ke neng shi you yu ji huo xing zhong xin de jin shu li zi bei ao ge suo zhi 。yi shang jie guo biao ming ,gai mei shu yu si an suan dan bai mei ,ju hen you ke neng yu lan yuan can jian xing fen li dan bai de ning jiao lie hua xian xiang you guan 。wei le chan ming fen li dan bai de ning jiao xing cheng ji zhi ,di qu lan yuan can ji rou zhong de ji qiu dan bai dui ji jin hang suan (AM)/jian (KM)pHdiao jie ,bing yan jiu ji li hua 、gou xiang yi ji ning jiao te xing xiang dui yu tian ran ji qiu dan bai (NM)de bian hua 。AMzai 40?Cfu yo hou rong jie du zui di er zhuo du zui gao ,biao ming jing guo suan chu li de ji qiu dan bai rong yi fa sheng bian xing he ju ji 。yuan er se pu jie guo xian shi suan jian chu li hui shi ji qiu dan bai de er ji jie gou fa sheng bian hua ,dang pHdiao hui zhong xing shi ,KMxiang dui AMgeng jie jin yu tian ran zhuang tai 。liu bian xue fen xi jie guo biao ming ,AMzai jia re guo cheng zhong chu neng mo liang mei you fa sheng xian zhe xing bian hua ,biao ming suan chu li shi ji ji qiu dan bai gou xiang fa sheng bu ke ni de bian hua ,yin qi jiang lie de bian xing he ju ji xian xiang ,zui zhong dao zhi le ning jiao neng li sang shi 。zhe yi jie guo ye ce mian shui ming jian fa zhi bei lan yuan can fen li dan bai xiang dui geng wei ke hang 。wei le shi xian zai lan yuan can jian fen li dan bai de gong ye hua ying yong ,tian jia le bu tong bi li de da dou fen li dan bai yi zhi ji nei yuan xing dan bai mei de huo li bi mian ning jiao lie hua 。jie guo fa xian ,1%de da dou fen li dan bai ke you xiao yi zhi nei yuan xing dan bai mei dui ji qiu dan bai chong lian de jiang jie ,ju di gao yu mei de ning jiao jiang du 。hou xu zai jian fen li dan bai tian jia pu tao tang suan nei zhi (glucono-δ-lactone,GDL)he gu an xian an zhuai an mei (transglutaminase,TG),zhi bei chu yi kuan shui fen han liang gao ,ning jiao jiang du di kuo ge ju jiao tun yan kun nan de ren qun shi yong de ruan ning jiao yu mei zhi pin 。jie guo biao ming 2%GDLhe 1%TGde tian jia jun neng cu shi ji fa sheng ning jiao hua ,ji zhong GDLning jiao jiang du yao gao yu TGzu ,cheng xian chu geng gao de ying du ,bai du yi ji geng wei zhi mi de ning jiao wang lao jie gou 。hua xue jian he SDS-PAGEjie guo biao ming ,GDLneng gou di gao dan bai de shu shui xing bing ju cu jin er liu jian de xing cheng ,er TGneng gou cu jin ji qiu dan bai de jiao lian ,xing cheng da fen zi ju ge wu ,cong er cu jin dan bai ning jiao de xing cheng 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自集美大学的林怡晨，发表于刊物集美大学2019-07-12论文，是一篇关于蓝圆鲹论文,碱溶解等电点沉淀法论文,凝胶劣化论文,丝氨酸蛋白酶论文,肌球蛋白论文,集美大学2019-07-12论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自集美大学2019-07-12论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：蓝圆鲹论文; 碱溶解等电点沉淀法论文; 凝胶劣化论文; 丝氨酸蛋白酶论文; 肌球蛋白论文; 集美大学2019-07-12论文;