细胞色素C与TRPV通道开通的关系

论文摘要

激光针灸疗法是用小功率输出激光束来代替传统的金属针灸针,对穴位进行照射以产生的生物刺激作用来达到治疗目的的一种治疗方法,不仅具有超过传统针灸的独特理疗作用,而且拥有无创治疗、无交叉感染、患者易于接受等优点。既往的研究发现,穴位点肥大细胞富集,当激光照射穴位点时,观察到肥大细胞脱颗粒增加。将肥大细胞进行实验发现,肥大细胞外的Ca2+浓度较细胞内高,但细胞膜中存在Ca2+泵,阻止Ca2+通过渗透作用进入细胞内。进一步的研究把肥大细胞作为激光作用对象,结果表明用激光刺激能够促使细胞膜上TRPV4通道打开,从而使细胞外的Ca2+进入细胞内,增大细胞内Ca2+浓度。对于肥大细胞内Ca2+浓度提高会导致脱颗粒的原因,目前已经有比较完整的解释,原因与钙调素（CaM）等若干蛋白在较高的胞内Ca2+浓度刺激下会相继激活有关[1]。脱落到细胞外颗粒的主要成分是组织胺和白介素等,已有实验表明,脱颗粒与提高痛阈有关,能达到针灸治疗的效果[2]。但是人们对为什么激光照射会使得肥大细胞的TRPV4通道[3,4]打开,尚无明确的解释。本文利用扫描共聚焦显微镜和荧光光谱方法,研究激光照射对RBL-2H3肥大细胞内Ca2+浓度和线粒体内细胞色素C的影响,尝试探索TRPV4通道打开的机制。初步认为激光开通TRPV4通道的机理为:一激光激活线粒体内膜上的细胞色素C氧化酶。二细胞色素C氧化酶被激活后产生氧自由基（ROS）,从而使细胞色素C氧化,并使其脱出线粒体。三随着细胞色素C脱出,胞内pH值增大,使得TRPV4钙离子通道打开。四TRPV4通道开放,胞外钙离子内流从而使胞内钙离子浓度升高,钙离子浓度升高后又导致肥大细胞脱颗粒,释放组胺。五组胺的释放已被证明在针灸的治疗中起到重要的作用,能够镇痛。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 基本介绍
• 1.1 激光针灸
• 1.2 肥大细胞
• 1.3 线粒体
• 1.4 细胞色素C
• 1.5 细胞色素C氧化酶
• 1.6 肥大细胞上的 TRP通道
• 1.6.1 TRP通道的发现
• 1.6.2 TRP通道的分类
• 1.6.3 TRP通道的结构和功能
• 1.6.4 TRPV4的发现和分布
• 1.6.5 TRPV4的激动剂和阻断剂
• 1.6.6 肥大细胞上的TRPV
• 第2章 转盘式共聚焦显微镜的使用
• 2.1 激光扫描共聚焦显微镜
• 2.1.1 成像基本原理
• 2.1.2 特点与功能
• 2.2 转盘式共聚焦显微镜
• 2.2.1 成像基本原理
• 2.2.2 特点与功能
• 2.2.3 奥林巴斯IX2-DSU的具体使用
• 第3章 细胞培养
• 3.1 培养细胞的生物学知识
• 3.2 实验所用细胞的具体培养
• 3.2.1 RBL-2H3细胞
• 3.3 细胞培养过程中的一些相关技术要点
• 3.3.1 消毒灭菌
• 3.3.2 细胞的冻存与复苏
• 第4章 激光开通TRPV的过程
• 4.1 激光激活细胞色素C氧化酶
• 4.1.1 细胞色素C氧化酶作为靶位的原因
• 4.1.2 组胺的释放
• 4.1.3 组胺的测定方法
• 4.1.4 实验设备
• 4.1.5 组胺的测定步骤
• 4.1.6 组胺OPA光谱
• 4.1.7 不同波长的激光对 RBL-2H3脱颗粒释放组胺的影响
• 4.2 细胞色素 C氧化酶被激活后产生氧自由基（ROS）
• 4.3 细胞色素C脱出线粒体
• 4.3.1 实验仪器及试剂
• 4.3.2 细胞色素 C抑制剂—Bcl-2
• 4.3.3 实验步骤
• 4.3.4 实验结果
• 4.4 随着细胞色素 C的脱出，胞内的pH值增大
• 4.4.1 实验试剂
• 4.4.2 实验步骤
• 4.4.3 实验结果
• 4.5 pH值变化对 TRPV通道的开关的影响
• 4.6 TRPV4通道开放，胞内钙离子浓度升高
• 4.6.1 实验步骤
• 4.6.2 实验结果
• 4.7 钙离子浓度升高导致组胺释放
• 4.7.1 实验步骤
• 4.7.2 实验结果
• 4.8 组胺的镇痛作用
• 结论
• 参考文献
• 致谢