禽流感重组枯草芽孢杆菌的构建及实验免疫研究

论文摘要

为研制安全有效并能常温保存的粘膜免疫AIV疫苗,本研究采用枯草芽孢杆菌（B.S.）识别的启动子和信号肽构建了表达载体pBC38C,并将GFP基因克隆到pBC38C中,筛选阳性重组质粒,转化入B.S.,阳性菌的菌体和菌落均有明显荧光,证实了表达载体能实现外源基因在B.S.中表达。在选择压力条件下,质粒遗传稳定率为96 %左右,无选择压力下,稳定性下降,为56 %左右。以lacZ为报告基因,测定表达载体的活性,β-半乳糖苷酶活性最高为26 mU/mL。对小鼠进行大剂量、长时间饲喂,结果证实菌株对动物安全,能非特异性地提高小鼠细胞免疫水平。将AIV H5N1 HA基因克隆到pBC38C中,构建HA基因重组B.S.,以CTB为基因佐剂,Western blot、IFA等检测表明,HA基因在B.S.中得到表达。小鼠免疫试验结果表明,所构建的重组菌能刺激小鼠产生较高水平的抗AIV HA特异性细胞免疫和粘膜免疫以及低水平的体液免疫,CTB作为粘膜免疫佐剂,能提高粘膜免疫水平。

论文目录

• 提要
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 粘膜免疫的研究进展
• 1 粘膜免疫机理研究
• 2 肠道粘膜免疫研究进展
• 3 粘膜免疫佐剂研究进展
• 第二章 枯草芽孢杆菌的研究进展
• 1 枯草芽孢杆菌基因组研究
• 2 枯草芽孢杆菌基因表达特性
• 3 枯草芽孢杆菌常用宿主与重组表达载体
• 4 枯草芽孢杆菌外源蛋白的分泌表达
• 5 枯草芽孢杆菌外源蛋白的细胞内表达
• 6 枯草芽孢杆菌研究中存在的问题和发展方向
• 第二篇 研究内容
• 第一章 枯草芽孢杆菌表达载体的构建及绿色荧光蛋白的表达
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 枯草芽孢杆菌表达型质粒的遗传稳定性及其对宿主菌生物学特性的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 枯草芽孢杆菌表达载体活性检测
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 枯草芽孢杆菌对小鼠的安全性及免疫调节研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 禽流感病毒H5N1 HA基因重组枯草芽孢杆菌的构建及免疫原性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻博期间发表的学术论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介
• CURRICΜLUM VITAE