丹参素异丙酯的药效学研究

论文摘要

自由基（Free Radical,FR）通常指能独立存在的带有未成对电子的原子、原子团、分子或离子,包括超氧阴离子自由基（O2-·）,羟自由基（·OH）、脂氧自由基（LO·）等。在生理情况下,自由基在体内不断产生,也不断被消除,不但对机体无害,而且还有有益作用;但是在病理情况下,机体由于自由基产生增加、清除自由基能力减弱等原因导致体内自由基过剩,这些过剩的自由基将会导致不良的生物学效应,从而对机体构成危害。大量的研究表明:有超过100种疾病与自由基代谢紊乱有关,包括各种癌症、心脑血管疾病、胃肠道疾病等。因此,深入研究自由基对机体的生理、病理作用及其与疾病的关系对与其有关疾病的防治具有重要意义。复方丹参滴丸（Compound danshen dropping prill,CDDP）是一种中成药,主要成分有丹参、三七、冰片,具有活血化瘀、理气止痛等作用。我们的课题协作组在对复方丹参滴丸体内代谢产物的研究中发现丹参素异丙酯（Danshensuisopropyl ister,DIE）是复方丹参滴丸在体内的一种活性代谢物,其常温下为棕黄色液体,易溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶剂。在对其研究中发现丹参素异丙酯具有扩张大鼠肠系膜动脉,增加大鼠心室肌收缩力等作用,而关于其抗自由基损伤及其他药理作用及其作用机制尚未研究。本课题主要从以下三个方面来研究丹参素异丙酯的药理作用:（1）建立D-半乳糖（D-galactose,D-gal）致衰老模型,观察衰老大鼠小脑组织SOD活力、MDA含量和浦肯野细胞凋亡指数的改变及丹参素异丙酯对它们的影响,并用维生素E（Vitamine E,VE）作为阳性对照;（2）利用Langendroff离体灌流技术,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察丹参素异丙酯对离体大鼠模拟缺血再灌注损伤心肌线粒体结构改变及能量物质代谢的影响,并用复方丹参滴丸作为阳性对照;（3）利用Langendroff灌流技术,建立外源性自由基致离体大鼠心律失常模型,观察丹参素异丙酯对外源性自由基所致心律失常（Cardiac arrhythmias,CA）的影响,并用维拉帕米（Verapamil,VPL）作为阳性对照。研究方法第一部分:取健康6月龄Wistar大鼠80只,雌雄各半,随机分为空白对照组、衰老模型组、阳性对照药（维生素E 100.0 mg/kg）组、丹参素异丙酯21.0 mg/kg和7.0 mg/kg两个剂量组,共5组,每组16只。空白对照组:每天皮下注射4 mL/kg的0.85%生理盐水;衰老模型组:每天皮下注射2.5%D-半乳糖2mL/kg的同时皮下注射0.85%生理盐水2.0 mL/kg;各给药组:每天皮下注射2.5%D-半乳糖2.0 mL/kg的同时,皮下注射相应浓度的药物2.0 mL/kg。每天一次,连续8周。末次给药1小时后对各组动物进行处理,各组一半动物小脑用于测定大鼠小脑组织中的超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量;另一半动物小脑采用甲基绿—哌洛宁染色法计数各组大鼠小脑皮质浦肯野细胞的凋亡指数（Apoptotic index,AI）。第二部分:取健康Wistar大鼠80只,随机分为空白对照组、单纯缺血再灌注模型组、阳性对照药（复方丹参滴丸50.00 mg/L）前保护及后保护组、丹参素异丙酯4.00 mg/L和0.04 mg/L两个剂量的前保护及后保护组。共8组,每组10只。利用Langendroff灌流技术,制备心肌缺血再灌注损伤模型,分别在缺氧前及缺氧后,在灌流液中加入复方丹参滴丸或丹参素异丙酯对心肌给予保护。空白对照组:用Krebs-Hanseleit磷酸缓冲液持续灌流75 min;单纯缺血再灌注模型组:用Krebs-Hanseleit磷酸缓冲液预灌15 min,然后停灌40 min,再恢复灌流20min;各用药组:分别在预灌或再灌时用加入相应浓度药物的灌流液灌流,其他处理同单纯缺血再灌注模型组。各组所用灌流液的药物浓度分别是50.00 mg/L、50.00 mg/L、4.00 mg/L、4.00 mg/L、0.04 mg/L、0.04 mg/L。各组大鼠心脏灌流结束后,7只动物心脏采用高效液相色谱仪测定其组织中的高能磷酸化合物的含量变化;剩余3只动物利用H-7500透射电镜观察心肌细胞超微结构。第三部分:取健康Wistar大鼠50只,随机分为空白对照组、心律失常模型组、阳性对照药（维拉帕米1.00 mg/L）组、丹参素异丙酯4.00 mg/L、0.04 mg/L两个剂量组,共5组,每组10只。采用Langendorf灌流装置对大鼠离体心脏灌注硫酸亚铁（0.025 mmol/L）/抗坏血酸（0.100 mmol/L）的方法,复制自由基致心律失常的模型,并观察丹参素异丙酯对其影响。空白对照组:离体心脏用Krebs-Hanseleit磷酸缓冲液灌注45 min;心律失常模型组:离体心脏用Krebs-Hanseleit磷酸缓冲液预灌15 min后,灌流液中加入硫酸亚铁（0.025mmol/L）/抗坏血酸（0.100 mmol/L）持续灌注30min;阳性对照药（维拉帕米1.00 mg/L）组、丹参素异丙酯4.00 mg/L、0.04 mg/L两个剂量组用加入相应浓度药物的Krebs-Hanseleit磷酸缓冲液预灌15 min,其余处理同心律失常模型组。每只心脏在灌流的同时,将心电图机上的导联线通过电极分别放在右心房和左心室尖部并记录心电图。结果第一部分:与空白对照组比较,衰老模型组大鼠小脑组织SOD活性降低、MDA含量增加、蒲肯野细胞的凋亡指数增加（P＜0.01）;阳性对照药（维生素E100.0 mg/kg）组、丹参素异丙酯21.0 mg/kg和7.0 mg/kg两个剂量组与衰老模型组相比,小脑组织SOD活性均明显增加、MDA含量显著降低,蒲肯野细胞凋亡指数显著降低（P＜0.01）;丹参素异丙酯21.0 mg/kg组与维生素E 100.0 mg/kg组的SOD活力、MDA含量、蒲肯野细胞的凋亡指数差异无显著性（P＞0.05）;丹参素异丙酯7.0 mg/kg组与前两组相比大鼠小脑组织SOD活性降低、MDA含量增加、浦肯野细胞的凋亡指数增加（P＜0.05）。第二部分:高能磷酸化合物（High energy phosphates,HEP）的含量:与空白对照组相比,模型组的三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）、二磷酸腺苷（Adenosine diphosphate,ADP）、一磷酸腺苷（Adenosine monophosphate,AMP）及腺嘌呤核苷酸总量（Total adenine nucleotides,TAN）显著降低（P＜0.01）;复方丹参滴丸50.00 mg/L前保护和后保护组、丹参素异丙酯4.00 mg/L前保护和后保护组及丹参素异丙酯0.04 mg/L前保护和后保护组的ADP、AMP及AN与模型组相比显著升高（P＜0.01）（丹参素异丙酯0.04 mg/L前保护组的ADP除外）;丹参素异丙酯0.04 mg/L前保护组的ADP除外与模型组相比有一定升高（P＜0.05）;复方丹参滴丸50.00 mg/L前保护和后保护组、丹参素异丙酯4.00 mg/L前保护和后保护组的ATP含量与模型组相比升高（P＜0.05）。电镜显示:空白对照组心肌肌原纤维排列整齐,明暗带清晰,心肌细胞核膜和线粒体膜完整,染色质均匀、细密,线粒体基质致密,嵴排列紧密整齐,线粒体和糖原颗粒丰富;单纯缺氧/复氧模型组心肌细胞超微结构损伤最严重,心肌细胞有少量轻度坏死区,肌节排列紊乱或消失,核的一端基质明显水肿,线粒体大部分或全部的脊和膜融合或消失,线粒体和糖原数量明显减少;复方丹参滴丸50.00 mg/L前保护、后保护组及丹参素异丙酯4.00 mg/L前保护、后保护组超微结构接近空白对照组,损伤较轻;丹参素异丙酯0.04 mg/L前保护、后保护组心肌细胞超微结构的损伤与模型组相比有所改善,但损伤仍较严重。第三部分:空白对照组离体大鼠心脏无一例发生心律失常;模型组离体大鼠心脏总心律失常发生率100%,主要发生传导阻滞和室性早搏两种类型的心律失常;阳性对照药（维拉帕米1.00 mg/L）组、丹参素异丙酯4.00 mg/L、0.04 mg/L两个剂量组与模型组相比,心律失常发生率明显降低。结论1.丹参素异丙酯具有抗氧化作用及抗凋亡作用,与阳性对照药维生素E相似。2.丹参素异丙酯具有保护缺血再灌注损伤心肌的作用,与阳性对照药复方丹参滴丸相似。3.丹参素异丙酯具有抗外源性自由基生成系统所致心律失常的作用,与阳性对照药维拉帕米相似。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 论文正文 丹参素异丙酯的药效学研究
• 第一部分 丹参素异丙酯对D-半乳糖致衰老大鼠小脑的抗氧化及抗凋亡作用
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 丹参素异丙酯对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第三部分 丹参素异丙酯对外源性自由基致心律失常的影响
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图表
• 参考文献
• 综述 自由基生物学的研究进展
• 参考文献
• 英文缩写词
• 在学期间发表文章
• 致谢