论文摘要
目的:观察6%中分子羟乙基淀粉130/0.4（HES130/0.4）对全脑缺血/再灌注（ischemia-reperfusion）大鼠血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）的影响,探讨HES130/0.4影响血脑屏障的可能机制。材料与方法1实验分组及动物模型制备雄性健康SD大鼠48只,月龄2～3月,体重200～250g（河北医科大学实验动物中心提供）,随机分为3组（n=16）,假手术组（S组）、缺血/再灌注组（R组）、羟乙基淀粉组（H组）。假手术组（S组）:暴露股动静脉,只分离双侧颈总动脉,经枕骨大孔腹侧开颅暴露基底动脉第二无血管区,穿线但不阻断;缺血/再灌注组（R组）:采用3血管阻断法阻断双侧颈总动脉和基底动脉10 min后再开放,再灌注12小时;羟乙基淀粉组（H组）:采用3血管阻断法阻断双侧颈总动脉、基底动脉10 min后再开放,在再灌注即刻经股静脉以0.2ml/min的速率输注5ml/kg的HES130/0.4（液体在恒温水箱中预热于37℃）,再灌注12小时。脑缺血前10min、脑缺血10min、再灌注后10min采集股动脉血监测动脉血氧分压和二氧化碳分压。各组在阻断前10min,再灌后10min及处死前10min分别检测血细胞比容（Hct）。2标本的采集及检测方法2.1大鼠脑组织核转录因子-κB（NF-κB）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的检测缺血/再灌注12小时后每组随机抽取6只大鼠首先以水合氯醛腹腔注射麻醉,断头处死后,在冰盘上完整取出脑组织,去除中脑、脑桥、垂体等组织,分离左右两侧大脑,左侧大脑冷盐水冲洗后置于4%多聚甲醛中浸泡,采用免疫组织化学染色检测脑组织NF-κBP65的表达,右侧大脑制成匀浆,以3500r/min转速离心10min,取上清液保存液氮罐内,采用放射免疫法检测脑组织匀浆中TNF-α的含量。2.2光镜观察皮质的病理学改变取左侧大脑额叶同一部位,切取3mm×3mm的组织块,冷盐水冲洗后置于4%多聚甲醛中浸泡过夜,在10×40倍光镜下观察皮质的病理学改变。2.3大鼠脑组织含水量的测定缺血/再灌注12小时后每组随机抽取5只大鼠以水合氯醛腹腔注射麻醉,断头处死后,在冰盘上迅速完整取出脑组织,去除中脑、脑桥、垂体等组织,滤纸吸干表面水份,置于干燥小瓶中-20℃保存。用干（110℃,24小时烘干）、湿重法计算脑水含量,作为脑水肿程度的判断标准。计算方法:脑含水量（%）=（湿重-干重）/湿重×100%2.4大鼠每克脑组织内伊文思蓝含量（EB）的测定每组其余5只大鼠于再灌注12h后以水合氯醛麻醉,经股静脉注入2% EB生理盐水溶液（4m1/ kg）,1h后开胸,通过左心室灌注室温生理盐水（灌注压为110 mmHg）,直到右心房流出的液体为无色时断头取脑,去除小脑及脑垂体留取双侧大脑组织,剥离干净软脑膜、血凝块,称重,匀浆,放入其4倍体积甲酰胺的离心管中,加上橡皮塞50℃水浴48h,以3000r/min转速离心15min,取上清液-20℃保存待测。结果1各组间体重、月龄比较差异无统计学意义（P>0.05）。脑缺血前10 min、脑缺血10min再灌后10 min血气指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。各组阻断前10min、再灌注后10min及处死前10min的Hct比较差异无统计学意义（P>0.05）。2大鼠脑组织内NF-κB活性的变化与S组比较,R组、H组NF-κB的表达增加（P<0.01）;H组NF-κB的表达较R组降低（P<0.01）。3脑组织匀浆中TNF-α含量的变化与S组比较,R组、H组脑组织再灌注后TNF-α含量升高（P<0.01）;R组再灌后脑组织TNF-α较H组升高（P<0.01）。4大鼠脑组织含水量的测定与S组比较,R组脑含水量增加（P<0.05）,H组脑含水量差异无统计学意义（P>0.05）;与H组比较,R组脑含水量增加（P<0.05）。5大鼠每克脑组织内伊文思蓝含量的测定与S组相比,R组每克脑组织内伊文思蓝含量增高（P<0.05）,H组每克脑组织内伊文思蓝含量差异无统计学意义（P>0.05）;与R组相比,H组每克脑组织内伊文思蓝含量降低（P<0.05）。6光镜下皮质的病理学改变S组:神经元形态结构正常,胞浆丰富、均匀、淡染,核圆形或椭圆形,核仁明显。R组:损伤范围严重,神经细胞严重固缩、深染,尼氏体消失,核浆融合,细胞周围中度水肿。H组:大部分神经元细胞皱缩,结构基本正常,核椭圆形,核仁清楚,细胞周围轻度水肿。结论HES130/0.4能够减轻大鼠全脑缺血/再灌注时BBB的破坏,降低其通透性,减轻脑水肿,具有一定的脑保护作用,其作用与抑制TNF-α和NF-κB的表达,减轻炎症损伤有关。
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