缺氧人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19差异MicroRNA表达及鉴定

论文摘要

第一部分缺氧人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19表达特性目的观察缺氧对人视网膜色素上皮株ARPE-19的细胞形态、增殖以及对其分泌的血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子表达的影响。方法将ARPE-19细胞分别置正常和缺氧环境中培养0hr、8hr、24hr、48hr后,MTT比色法检测ARPE-19细胞的增殖;Hochest染色观察细胞形态、检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;选取缺氧24hr的细胞,RT-PCR检测VEGF mRNA及PEDF mRNA的表达,经计算机图像处理,定量分析。结果缺氧组的MTT实验吸光度（A值）明显低于正常组,缺氧48小时时差异最显著（P＜0.001）;Hochest染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率,缺氧24小时时其凋亡率明显高于正常组（P＜0.001）;RT-PCR检测VEGF mRNA表达缺氧组明显高于正常组,PEDF mRNA表达缺氧组明显低于正常组。结论缺氧可加剧ARPE-19细胞的凋亡,破坏VEGF与PEDF表达的平衡,调节视网膜色素上皮细胞的活性是抑制脉络膜新生血管生成的关键。第二部分缺氧人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19 MicroRNA的差异表达目的MicroRNA在调控基因表达及组织功能等方面发挥着重要的作用。但对其在眼科领域对于CNV的形成的调控却研究的很少。本部分目的在于筛选CNV形成相关的MicroRNA。方法视网膜色素上皮细胞株ARPE-19置缺氧环境24小时后,抽提RNA进行MicroRNA芯片（LC science公司）检测。对于信号值高于1000的差异MicroRNA利用实时定量PCR（q-PCR）进行检测。结果具有显著性差异（即p值＜0.01）表达转录子共有42条miRNA,其中低氧后上调的18条,下调的24条,信号值差异位居前十位的MicroRNA分别为Mir-1、Mir-1469、Mir-663、Mir-1915、Mir-29c、Mir-574-5p、Mir-638、Mir-29b-1、Mir-1308、Mir-10a,其中除Mir-1、Mir-29c、Mir-1308表现为下调外,其余均表现为上调。信号值高于1000的MicroRNA共有28条,其中Mir-638、Mir-1308、Mir-125b、Mir-155、Mir-30c、Mir-125a-5p与芯片检测结果相一致,Mir-155表达异常最为显著。结论视网膜色素上皮细胞株ARPE-19细胞经缺氧处理后,很多MicroRNA发生差异性表达,可能与CNV的形成密切相关。第三部分MicroRNA-155转染人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19活性初步研究目的:探讨对于视网膜色素上皮细胞株ARPE-19细胞,Mir-155是否具有一定的抗缺氧活性,并对CNV的形成具有一定的调节作用。方法:Mir-155转染视网膜色素上皮细胞株ARPE-19细胞后,将其置缺氧环境0hr、8hr、24hr、48hr后,MTT比色法检测ARPE-19细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:转染组的MTT实验吸光度（A值）高于未转染组,缺氧48小时时差异最明显;流式细胞仪检测细胞凋亡率,转染组凋亡率低于未转染组（P＜0.001）,缺氧48小时时差异最明显。结论:Mir-155转染视网膜色素上皮细胞株ARPE-19细胞后,具有一定的抗缺氧活性,对CNV的形成具有一定的调节作用。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 缺氧人视网膜色素上皮细胞株 ARPE-19表达特性
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 缺氧人视网膜色素上皮细胞株 ARPE-19 MicroRNA 的差异表达
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 MicroRNA-155转染人视网膜色素上皮细胞株 ARPE-19活性初步研究
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 全文总结
• 参考文献
• 综述:MicroRNA 及其在眼科领域的研究进展
• 发表的论文
• 致谢