原发性肝癌靶向超声造影剂的制备及体外实验研究

论文摘要

背景原发性肝癌的早期诊断是临床科研工作重点关注的问题之一。超声造影剂的出现使原发性肝癌早期的超声诊断进入新的层次。由于超声造影剂本身的理化特性,使在其表面加载生物活性物质成为可能,这也导致了“靶向”超声显影剂的出现。所谓“靶向显影”,即通过在微泡造影剂表面连接抗体或配体,而特异性的亲和于特殊的血流区域或细胞表面,以更好的区分病变。关于各种靶向显影的研究已经成为国内外研究的热门课题。根据微泡显影剂外壳的不同化学成分,现有的几种不同的连接特异性配体的方法。在众多连接方法中,包括直接吸附、静电吸附、偶联剂共价连接等,综合利弊,生物素-亲和素系统（biotinavidinsystem）的运用以其稳定性和高效性受到较为广泛的认可。但在现有的几种运用方式中,依然存在较大的资源浪费,与欠缺灵活性等问题。因此,此次研究设想在前人研究的基础上,改良生物素——亲和素系统的应用方式;同时以一种抗人肝癌细胞膜抗原的抗体,作为微泡表面的生物活性物质,创建更灵活、经济的原发性肝癌靶向超声微泡造影剂制备方法。目的在白蛋白超声造影剂—全氟显的基础上,发展前人对生物素——亲和素系统的运用,探索新的方法制备原发性肝癌靶向超声微泡造影剂。方法一、靶向超声造影剂的制备1.制备含全氟丙烷的白蛋白超声造影剂。2.以生物素修饰白蛋白微泡的蛋白质外壳,再以此作为生物素-亲和素技术的作用起点,先后加入亲和素与生物素化抗体,最终合成靶向微泡。3.每一个步骤均以流式细胞仪监测其效率,评价出最佳剂量比例。二、原发性肝癌靶向超声造影剂的体外研究1.以微泡凝集实验验证其抗体活性。2.以肝癌细胞的花环形成实验与花环阻断实验,验证其特异性。3.以四种剂量方案分别制备原发性肝癌靶向微泡,分析不同剂量方案下制备的靶向微泡的特异性结合效果。结果一、成功的制备了靶向造影剂:运用生物素-亲和素系统,以三步法制备靶向微泡造影剂,在(Mbio=24μg、MAV=9μg、MmAbs=9μg)/108个微泡的剂量比例下,可使96.03%的微泡表面带有抗体。二、体外研究对靶向造影剂活性与特异性的验证:1.玻片凝集实验:当原发性肝癌靶向微泡经过肝癌细胞的总蛋白处理后,中加入兔抗小鼠抗IgG,微泡形成凝集团块,对照组未见凝集。2.肝癌细胞的花环形成实验:所制备出的原发性肝癌靶向超声微泡组在花环形成实验中呈阳性;空白微泡与同型对照IgG微泡组在花环形实验中成呈阴性;肝星状细胞组（不表达肝癌的膜抗原）在花环形实验中呈阴性。3.肝癌细胞的花环阻断实验:花环形成阻断呈阴性。4.不同剂量方案下制备的靶向微泡的靶向结合效果分析:各组的靶向微泡的靶向结合效果的差异无统计学意义结论以此实验总结出的方案能制备出特异与稳定的原发性肝癌靶向超声微泡显影剂,而且较之前人的方法更经济、更高效、更灵活。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一节 前言
• 第二节 材料和方法
• 第三节 结果
• 第四节 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 缩略语中英文对照
• 攻读硕士期间成果
• 致谢