论文摘要
目的利用双向凝胶电泳-基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（2-DE-MALDI-TOF-MS）等差异蛋白质组学技术分析外周动脉硬化、小腹主动脉瘤、大腹主动脉瘤患者和健康人的血清，筛选并鉴定血清差异蛋白分子，同时探讨其与疾病的关系，为研究小腹主动脉的标志物提供生物学线索和方向。方法收集我院门诊和病房的下肢动脉硬化、小腹主动脉瘤和大腹主动脉瘤患者入院次日空腹的外周静脉血清，以及志愿健康人的血清，Aurum试剂盒去除血清高丰度蛋白预处理后，利用双向凝胶电泳技术分离血清蛋白，Imagemaster5.0图像软件分析四组血清蛋白的蛋白相对表达量%Vol值，并对各组间进行比较。凝胶上挖取差异蛋白点经MALDI-TOF-MS质谱技术分析获取肽质量指纹图谱（PMF），利用Mascot软件在NCBInr数据库内检索以鉴定蛋白质。结果四组间除血胆固醇水平外其余血管疾病危险因素无统计学差异。四组凝胶均获得清晰的血清2-DE蛋白表达图谱。平均每张凝胶的双向电泳图谱可识别蛋白点数为1089±121个。筛选出有统计学意义的5个差异蛋白点，质谱成功鉴定出9种蛋白质，分别为：神经胶质纤维酸性蛋白异构体1、转铁蛋白、转化酸性卷曲螺旋含蛋白质1、触珠蛋白前体、触珠蛋白相关蛋白、α-1-微球蛋白、皮离蛋白前蛋白原、神经胶质γ成熟因子和前白蛋白。组间分析显示，神经胶质纤维酸性蛋白异构体1在正常对照组血清差异蛋白点-1的（%Vol）%值（1.94±0.72）显著高于PAD组（1.29±0.37）和large-AAA组（1.06±0.38）（P<0.05），提示其表达从正常对照组至PAD组、small-AAA组和large-AAA组呈下调趋势。large-AAA组血清的转化酸性卷曲螺旋含蛋白质1的（%Vol）%值（4.34±2.64）显著高于正常对照组（1.43±1.80）、PAD组（0.89±1.13）和small-AAA组（1.62±1.61）（P<0.05），提示其表达从正常对照组、PAD组、small-AAA组至large-AAA组呈逐渐上调趋势。Small-AAA组血清的触珠蛋白前体与触珠蛋白相关蛋白的（%Vol）%值（4.39±1.24）显著高于正常对照组（2.32±0.60）、PAD组（2.78±0.97）和large-AAA组（3.06±1.22）（P<0.05），提示其相对含量从正常对照组、PAD组至AAA组（含small-和large-AAA组）呈上调趋势。Small-AAA组血清的神经胶质γ成熟因子的（%Vol）%值（2.95±0.32）显著高于正常对照组（1.88±0.23）和PAD组（2.02±0.30）（P<0.05），large-AAA组血清的神经胶质γ成熟因子的（%Vol）%值（2.65±1.09）也显著高于正常对照组（1.88±0.23）（P<0.05），提示神经胶质γ成熟因子的相对含量从正常对照组、PAD组至AAA组（含small-和large-AAA组）亦呈上调趋势。结论成功构建小腹主动脉瘤和大腹主动脉瘤的血清2-DE蛋白表达谱，共筛检出5个差异蛋白点，其中1个表达下调，4个表达上调。MALDI-TOF质谱分析成功鉴定出9种蛋白质，其中触珠蛋白、触珠蛋白相关蛋白和神经胶质γ成熟因子在小腹主动脉瘤血清表达含量上调，大腹主动脉瘤的转化酸性卷曲螺旋含蛋白质1血清表达上调，上述差异蛋白可能成为腹主动脉瘤和动脉粥样硬化的候选标志物，也可能是潜在药物治疗靶点。