论文摘要
本研究尝试建立人类乳牙牙髓干细胞（stem cells from humanexfoliated deciduous teeth,SHED）体外快速扩增方法并对利用SHED进行牙齿再生进行了初步的探索。主要研究工作包括:SHED的分离培养及初步鉴定,SHED体外快速扩增方法的建立,Alu和Pf1地高辛标记探针的制备, E10.5鼠胚（小白鼠胚胎发育第10.5天）第一腮弓上皮和第二腮弓上皮分别与SHED的重组,SHED以50%比例掺入到E13.5鼠胚牙间充质细胞后与E13.5鼠胚牙上皮的重组,以及DNA原位杂交检测鼠源组织和人源组织。 实验结果表明,通过分离培养SHED,确定用低密度(1.5cells/cm2)接种更有利于SHED的体外快速扩增,通过低密度接种连续传代三次也就是大约六周的时间里,SHED大约扩增了101O—1011倍。通过克隆形成效率实验与矿化结节实验,确定这些扩增后的细胞仍然具有与第一次进行低密度扩增时的SHED即起始时的SHED基本相同的克隆形成能力而且在体外仍能形成矿化结节,因此保留了多分化潜能。利用小白鼠为模型建立了一套牙齿异体再生技术并正在不断完善,通过嵌合体组织重组实验,不但证明了不同种间的组织可以相互作用,正常的发育成牙齿结构,而且初步证实在牙齿的再生过程中SHED发育形成牙组织的潜能是以被诱导者的形式存在,即SHED只具有应答能力,而不具有诱导牙齿发育的潜能。作为被诱导者,对具有诱导能力的上皮组织或问充质组织作出应答反应,共同发育形成牙齿的结构。
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