导读:本文包含了病毒形态发生论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:慢病毒,骨髓间充质干细胞,骨形态发生蛋白2,血管内皮生长因子165
病毒形态发生论文文献综述
马跃刚,李强,陶旋,周桢杰,朱伦井[1]（2019）在《慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死》一文中研究指出背景:骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165均在骨修复过程中扮演着重要角色。利用慢病毒介导这2种基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗骨损伤具有重要意义。目的:观察慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165基因共转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死的效果,以此来探讨双基因在未来骨损伤修复过程中的可行性。方法:采用液氮冰冻联合髓芯减压方法制备股骨头坏死模型,将造模成功的实验兔分为3组(n=12):(1)未转染组:植入骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨;(2)单基因转染组:植入骨形态发生蛋白2转染的骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨;(3)双基因转染组:植入骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165共转染的骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨。术后3,6,9周各组分别处死4只兔子,Westernblot检测股骨头内骨形态发生蛋白2蛋白的表达量;苏木精-伊红染色观察股骨头坏死修复情况。实验方案经桂林医学院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:(1)术后3,6,9周各组均有骨形态发生蛋白2阳性表达,单基因转染组、双基因转染组表达量均高于未转染组(P <0.05),且呈递增趋势;术后3周,单基因转染组、双基因转染组骨形态发生蛋白2表达差异无显着性意义(P> 0.05);术后第6,9周,双基因转染组骨形态发生蛋白2表达量明显高于单基因转染组(P <0.05);(2)术后9周,双基因转染组新生骨痂可填满股骨头缺损处,未转染组、单基因转染组虽有骨痂形成,但均未填满缺损处;苏木精-伊红染色示未转染组有初级骨小梁形成,但骨细胞坏死较多,骨小梁较少;单基因转染组有大量骨小梁形成,形态较好,仅有部分中断,仍不及正常骨组织;双基因转染组形成大量成熟致密骨小梁,形态与正常骨组织无明显差异;(3)结果表明,慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因共转染兔骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗股骨头坏死的效果优于骨形态发生蛋白2单基因转染形式,且目的蛋白能在体内长期有效表达。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年33期）
周桢杰,李强,李诗鹏,陶旋,马跃刚[2]（2018）在《慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化》一文中研究指出背景:骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)均为骨修复过程中必不可少的细胞因子,利用慢病毒转染干细胞研究双因子作用下细胞的生物学改变具有重要意义。目的:探讨慢病毒介导人BMP-2和人VEGF-165双基因转染(2次转染)骨髓间充质干细胞的可行性以及转染后细胞的诱导成骨性能。方法:将骨髓间充质干细胞分为4组:(1)未转染组;(2)空载组:通过2次相同感染复数的空载慢病毒转染细胞;(3)BMP-2组:转染了单个目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP);(4)BMP-2/VEGF-165组:通过2次转染后携带双目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP,Lv-VEGH-165/RFP)。转染后不同时间点Western Blot检测目的蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖活性,转染后14 d检测各组细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)空载组、BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组在荧光显微镜下均可见相应的绿色及红色荧光蛋白表达;(2)转染后3 d,BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组均有相应目的蛋白高表达;转染后7,14,21 d,目的蛋白检测无明显变化(P>0.05);(3)BMP-2/VEGF-165组增殖稍快于BMP-2组(P<0.05),BMP-2组明显快于未转染组、空载组(P<0.05);(4)BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组碱性磷酸酶活力明显高于未转染组、空载组;(5)结果表明,慢病毒介导的h BMP-2和h VEGF-165双基因经2次转染成功转入兔骨髓间充质干细胞内,并长期稳定表达,该双因子的表达能通过刺激细胞碱性磷酸酶生成促使细胞更好的向成骨细胞分化。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年25期）
陶旋[3]（2018）在《慢病毒介导骨形态发生蛋白2转染兔骨髓间充质干细胞粘附脱钙骨基质修复股骨大段缺损》一文中研究指出目的:研究兔股骨大段缺损中植入慢病毒介导人骨形态发生蛋白2转染骨髓间充质干细胞粘附脱钙骨基质后的修复效果,探寻修复股骨大段缺损的新途径。方法:选取48只新西兰大白兔,股骨中段截骨钢板内固定法制备兔左侧股骨大段缺损模型。造模成功后,随机分成A、B、C、D组,每组12只。A组无修复材料植入,B、C、D分别植入脱钙骨基质、脱钙骨基质/BMSCs、慢病毒载体介导hBMP-2/BMSCs/脱钙骨基质。造后2、4、8及12周各组分别处死3只兔子,通过苏木精-伊红染色技术、生物力学分析、X射线技术评价股骨大段缺损修复的情况。结果:(1)X射线示A、B、C、D组均有不同的骨痂修复形成,且Lane-Sandhu X射线评分A<B<C<D组(P<0.05);(2)生物力学分析结果表明造模后8、12周时C、D组组间及同正常股骨比较,均有显着意义(P<0.05);(3)苏木精-伊红染色显示A组可见少量排列紊乱的骨小梁和大量的纤维组织;B组脱钙骨基质支架已降解,可见部分排列紊乱的骨小梁和大量的纤维组织;C组骨小梁已基本连接成线,开始塑形为皮质骨,髓腔再通不明显;D组已基本形成新的骨皮质,有髓腔再通。结论:骨缺损区域植入慢病毒载体介导hBMP-2/BMSCs/脱钙骨基质后能够促进骨传导、骨诱导和骨生成,对兔股骨大段缺损有较好的修复效果。(本文来源于《桂林医学院》期刊2018-06-01）
陶旋,李强,李诗鹏,石正松,周桢杰[4]（2018）在《慢病毒介导人骨形态发生蛋白2/骨髓间充质干细胞/脱钙骨基质修复股骨大段缺损》一文中研究指出背景:课题组前期研究已证实,慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2基因转染兔骨髓间充质干细胞在表达持续时间上具有一定的优势。但慢病毒介导人骨形态发生蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质能否在体内促进骨缺损修复的问题有待探究。目的:观察兔股骨大段缺损中植入慢病毒介导人骨形态发生蛋白2转染骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质后的修复效果,探寻治疗股骨大段缺损的新途径。方法:选取48只新西兰大白兔,股骨中段截骨钢板内固定法制备兔左侧股骨大段缺损模型。造模成功后,随机分成A,B,C,D组,每组12只。A组无修复材料植入,B,C,D组分别植入脱钙骨基质、脱钙骨基质/骨髓间充质干细胞、慢病毒载体介导人骨形态发生蛋白2/骨髓间充质干细胞/脱钙骨基质。造模后2,4,8及12周分别处死每组3只兔子,通过苏木精-伊红染色、生物力学分析,X射线检查评价股骨大段缺损修复的情况。结果与结论:(1)X射线示A,B,C,D组均有不同的骨痂修复形成,且Lane-Sandhu X射线评分A<B<C<D组(P<0.05);(2)叁点弯曲实验结果表明造模后8,12周时D组最大负荷显着高于C组,但显着低于正常股骨(P<0.05);(3)苏木精-伊红染色显示A组可见少量排列紊乱的骨小梁和大量的纤维组织;B组脱钙骨基质支架已降解,可见部分排列紊乱的骨小梁和大量的纤维组织;C组骨小梁已基本连接成线,开始塑形为皮质骨,髓腔再通不明显;D组已基本形成新的骨皮质,有髓腔再通;(4)结果提示,骨缺损区域植入慢病毒载体介导人骨形态发生蛋白2/骨髓间充质干细胞/脱钙骨基质后有大量的骨痂形成,良好的生物力学性能,完整的骨皮质,说明支架促进了骨传导、骨诱导和骨生成,对兔股骨大段缺损有较好的修复效果。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年09期）
张君[5]（2016）在《慢病毒介导的骨形态发生蛋白-2治疗骨质疏松骨折的效果》一文中研究指出目的探讨慢病毒介导的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)治疗骨质疏松骨折的效果。方法建立30只大鼠骨质疏松模型并进行分组。模型组和BMP-2治疗组(即BMP-2组)进一步制作左胫骨中段横行骨折模型,并于骨折当天在骨折局部分别皮下注射对照病毒和BMP-2质粒的慢病毒,而对照组不作骨折处理,只在相应部位皮下注射等体积的PBS。4d后分别处死各组3只大鼠,用Western blot检测骨折局部皮下BMP-2的表达情况;治疗8周后处死其余大鼠,取左胫骨进行X线检查并评分,测定骨密度及骨的生物力学指标,观察骨痂组织学变化。结果 BMP-2组大鼠骨折处皮下组织BMP-2蛋白表达水平明显高于对照组和模型组(P<0.05)。模型组和BMP-2组大鼠胫骨X线评分与对照组比较,明显降低(P<0.05),但是BMP-2组明显高于模型组(P<0.05)。模型组和BMP-2组大鼠骨密度明显低于对照组,而BMP-2组明显高于模型组(P<0.05)。模型组和BMP-2组大鼠胫骨3点弯曲参数(最大载荷、最大应力、破坏载荷和破坏应力)与对照组大鼠比较,均明显下降,而BMP-2组各参数较模型组明显升高(P<0.05)。骨痂组织HE染色显示,模型组大鼠软骨性骨痂较多,骨小梁较细,排列稀疏紊乱,而BMP-2组大鼠可见大量软骨性骨痂向骨性骨痂转变,新生形成大量编织骨小梁。结论慢病毒介导的BMP-2能促进骨形成,促进骨折部位愈合,对骨质疏松性骨折具有很好的治疗效果。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2016年05期）
蒲志超,谢伟勇,张兴世,何灿杰,黄富荣[6]（2016）在《人骨形态发生蛋白-7腺病毒的构建及其在犬转染骨髓基质干细胞后的表达》一文中研究指出目的探讨携带人骨形态发生蛋白-7(BMP-7)腺病毒构建方法以及其在犬转染骨髓基质干细胞中的表达情况。方法采用腺病毒表达系统体外构建携带BMP-7腺病毒的载体,转染人胚肾293细胞进行同源重组,利用BMP-7重组腺病毒转染犬骨髓基质干细胞,然后采用RT-PCR法检测BMP-7基因的表达。结果经过酶切鉴定证明获得了BMP-7转移质粒穿梭载体pTrack-BMP-7和BMP17重组腺病毒基因组,并包装出重组腺病毒,病毒滴度为3.6×10~(12)VP/ml。RT-PCR证明BMP-7在重组腺病毒转染后的犬骨髓间充质干细胞中得到了表达,转染效率约98%。结论 BMP-7重组腺病毒的成功构建与成功转染犬骨髓间充质干细胞以及其高效表达,为骨缺损与骨不连的基因治疗提供了实验依据。(本文来源于《疑难病杂志》期刊2016年07期）
马杰,周勇,范玉顶,刘文枝,江南[7]（2016）在《鲤疱疹病毒Ⅱ型的理化及生物学特性和超微形态发生》一文中研究指出为了查明鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)的理化与生物学特性以及病毒在细胞内的超微形态发生过程,利用新建立的对Cy HV-2敏感的异育银鲫脑组织细胞系(Gi CB),对Cy HV-2的理化及生物学特性进行了详细研究,比较了不同来源鱼类细胞系对Cy HV-2感染的敏感性,并对体外培养细胞中Cy HV-2病毒粒子及其超微形态发生过程进行了电镜观察。结果显示,Cy HV-2对热、酸、碱、有机溶剂和冻融敏感;常用鱼类细胞系EPC、RTG-2、Koi-Fin、CIK、CCK、PF-Fin对Cy HV-2的感染不敏感,特异性巢式PCR检测盲传至第7代Cy HV-2细胞培养物,结果均为阴性;Cy HV-2在Gi CB细胞中的增殖动态研究结果表明:病毒感染细胞经过12 h的隐晦期,24 h开始进入对数生长期,96 h病毒滴度达到最高值(107.52±0.26 TCID50/m L),然后进入平台期;透射电子显微镜观察结果显示,Cy HV-2感染细胞可分为吸附与侵入、复制与装配、成熟与释放3个主要过程,病毒进入对数生长期后,被感染细胞内可见形态典型的疱疹病毒颗粒。(本文来源于《水产学报》期刊2016年03期）
田科[8]（2016）在《装载骨形态发生蛋白4的腺病毒相关病毒诱导成骨的实验研究》一文中研究指出随着社会的发展,临床上创伤和骨病的患者日益增多,而随着医学技术的日新月异,很多以前治疗困难的骨科疾病在现在都有了新的治疗方法。但这也对骨科临床方面的一个老问题提出了新的要求,即“移植骨的来源”问题。临床上各类的骨病,如骨折不愈合,骨不连,脊柱融合,骨肿瘤切除后缺损的填充,多次关节置换后面临的骨缺损等疾病,都需要正常,健康,缺乏免疫源性的骨组织,但如果此时患者本身无法提供这样的骨组织,那么这类骨病的治疗将如何处理?现阶段患者自身的髂骨移植仍是治疗这类疾病的金标准,患者自体的髂骨具有载体,含有骨诱导因子,骨生成细胞的叁大基本成骨的要素。但同时也存在着取骨部位的并发症,如出血,感染,延长手术时间等不利因素。而同种异体骨应用的明显不利因素是价格昂贵,具有免疫源性以及传播疾病的风险。目前腺病毒相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)颗粒是现在国际上公认的最具有临床安全性的病毒载体。和传统的腺病毒(Adenovirus,AV)不同,腺病毒相关病毒可以高效定点整合至人染色体中,避免随机整合可能带来的抑癌基因失活和原癌基因激活的潜在危险性,对人类健康没有危害性,目前在美国应用于临床试验研究。AAV具有病毒颗粒小,转染率高,免疫源性低,在体内表达外源基因时间长,对分裂或不分裂的细胞都有很高的转染效率等优点,被视为最有前途的基因转移载体之一,在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)具有诱导体内干细胞向成软骨细胞和成骨细胞分化的能力。当BMPs基因被装载到病毒载体上,通过病毒转染的过程可结合入细胞的基因组中,通过基因的转录,翻译而合成相应BMPs蛋白分泌到细胞外。分泌到细胞外的蛋白通过作用于自身或周围的干细胞而诱导其向成软骨细胞或成骨细胞分化。本实验证明构建的AAV-BMP4具有良好的生物学活性。对异位骨组织形成过程的组织学分析证实该过程是通过软骨化骨的方式诱导生成的。骨组织工程中叁个基本要素分别是细胞,生长因子和载体。而现在常用的载体分别有羟基磷灰石(Hydroxyapatitie,HA),脱钙骨基质(Decalcified Bone Matrix,DBM)。羟基磷灰石是人体骨骼组织的主要无机组成成分,具有一定的硬度,表面多孔性,适于细胞的吸附,具有骨传导性,但是不具备骨诱导性。脱钙骨基质由同种异体骨或异种骨经脱钙处理,能降低免疫原性的骨移植材料,主要成分为含有多种活性骨诱导因子的I型胶原成分,具有骨诱导性。包装有骨形态发生蛋白4的腺相关病毒(AAV-BMP4)吸附在Gelfoam胶原上后形成的复合物具有明显的骨诱导性。当复合物被植入体内之后,Gelfoam上吸附的AAV-BMP4颗粒可转染骨骼肌肉内的细胞,诱导新生骨组织的形成,具有明显的骨诱导性。本课题包括以下叁部分:1.装载骨形态发生蛋白4的腺病毒相关病毒的构建及其活性测定;2.装载骨形态发生蛋白4的腺病毒相关病毒的体内成骨研究;3.诱导生成的骨组织治疗颅骨骨缺损的实验研究。第一部分装载骨形态发生蛋白4的腺病毒相关病毒的构建及其活性测定本实验的目的是将BMP4基因构建入AAV载体内,通过叁质粒共转染293包装细胞,然后进行细胞裂解,高速氯化铯梯度离心的方法纯化出AAV-BMP4。并通过体外DNA dot-blot杂交的方式来确定其浓度。待AAV-BMP4的纯化和浓度测定结束之后,将AAV-BMP4吸附于Gelfoam上并植入SCID小鼠的股肌袋内进行AAV-BMP4的活性测定。结果显示通过上述方法,可有效地构建出纯化后浓度达5×1012 vp/ml的AAV-BMP4病毒颗粒。纯化后的AAV-BMP4病毒颗粒植入小鼠的股肌袋内可成功诱导异位骨组织的形成,证明了本实验构建的AAV-BMP4具有良好的生物学活性。对异位骨组织形成过程的组织学分析证实该过程是通过软骨化骨的方式诱导生成的。第二部分装载骨形态发生蛋白4的腺病毒相关病毒的体内成骨研究本次进一步的研究是通过多种方法来探讨在小鼠背部皮下应用AAV-BMP4复合骨骼肌肉诱导异位成骨的可能性。实验设计采用了两种方法,一是应用整块状肌肉复合AAV-BMP4+Gelfoam,并将该复合物植入小鼠背部皮下来研究复合物的成骨能力的。二是将切碎后的骨骼肌肉预先移植入到小鼠的背部皮下,间隔特定时间后再在该部位植入AAV-BMP4+Gelfoam复合物来研究这种方法在小鼠皮下的成骨能力。叁组植入物在手术后的4,8,12周时接受X线检查,结果示HA/TCP组皮下和股肌袋中持续见明显的高信号影,DBM组未见明显的高信号影,AAV-BMP4组叁个时间段只在股肌袋可见高信号影。H.E和Von Kossa染色证实DBM组和AAV-BMP4组在小鼠的股肌袋中有新生骨形成,但小鼠的皮下部位未见明显的新生骨形成。HA/TCP组未见明显的新生骨组织形成;整块骨骼肌肉包裹的AAV-BMP4+Gelfoam复合体在小鼠的背部皮下没有诱发出明显的骨组织形成。X线和micro CT的检查均证实了小鼠的背部皮下无明显高信号影。组织学结果观察显示植入小鼠背部皮下的骨骼肌肌纤维中未见到新生血管的长入,而骨骼肌肌细胞出现了坏死的表现;切碎后的骨骼肌肉预先植入小鼠的背部皮下4周后,在此基础上重新植入的AAV-BMP4+Gelfoam复合体后4周出现了少量的新生骨组织。X线和micro CT的检查均证实了小鼠的背部皮下出现少量的高信号影,组织学观察也可见少量的骨组织形成。第叁部分诱导生成的骨组织治疗颅骨骨缺损的实验研究利用AAV-BMP4容易转染体内骨骼肌细胞的特性,然后诱导骨骼肌肌肉通过软骨化骨的方法形成大量的骨组织。然后等待骨组织形成稳定之后,取出这些骨组织移植入事先制备好的颅骨缺损的动物模型体内,用来修复小鼠的颅骨缺损。这种方法和干细胞为基础的基因治疗方法相比,省却了干细胞的分离,体外培养,体外病毒的转染,细胞复合载体等步骤,节约了时间,而且最重要的特点是需要成骨的部位不会出现骨组织的异常增多。该研究的方法包括体外应用Gelfoam吸附AAV-BMP4病毒形成复合物,并将该复合物移植入小鼠的股部骨骼肌肌袋内。在诱导骨骼肌成骨后12周时,建立小鼠颅骨缺损模型,通过手术的方法取出AAV-BMP4诱导的异位形成的骨组织,并将其移植至新建小鼠的颅骨缺损处。本实验的结果显示,经修剪移植入小鼠颅骨缺损模型处的骨组织在植入缺损处后,没有出现异常增生的现象,而是不断地随着时间的推移进行着外形的轻微改建,与宿主的骨组织结合良好。移植骨的外部毛刺逐渐消失,CT叁维重建所示的移植骨表面的微小空洞逐渐融合消失,移植骨与宿主颅骨缺损的骨组织边缘融合良好,该颅骨缺损得到了良好的修复。结论1.体外构建的AAV-BMP4具有良好的生物学活性。植入骨骼肌内后可诱导形成新生的骨组织,组织学分析证实该过程是通过软骨化骨的方式诱导生成的。2.叁组植入物中AAV-BMP4+Gelfoam在骨骼肌肉诱导成骨能力最强,DBM其次,而HA则缺乏诱导成骨的能力。在小鼠的皮下部位,叁种植入物都不具备诱导成骨的能力。整片肌肉包裹AAV-BMP4+Gelfoam的复合体不能在小鼠的皮下部位诱导出骨组织。在小鼠皮下预先植入切碎后的骨骼肌肉4周后,在该部位再植入AAV-BMP4+Gelfoam的复合体可诱导出少量的骨组织形成。3.AAV-BMP4诱导骨骼肌形成的新生骨组织可以成功地修复颅骨缺损的动物模型。移植的骨组织植入颅骨缺损后未出现过度生长的现象,且与宿主骨结合良好。(本文来源于《郑州大学》期刊2016-03-01）
曹修岭[9]（2015）在《甜菜黑色焦枯病毒侵染本生烟后复制场所的形态发生及诱导寄主反应的机制》一文中研究指出植物病毒中很大一类属于正义RNA病毒,正义RNA病毒在侵染过程中都会在寄主细胞的内膜系统上形成各种的复制场所以完成病毒RNA的复制。虽然关于正义RNA病毒复制场所的研究已经开展了较多的工作,但是对复制场所的形成机制仍有待深入研究。本研究以单链正义的甜菜黑色焦枯病毒(Beet black scorch virus, BBSV)为研究材料,对其侵染本生烟后复制场所的定位、形态发生以及叁维结构进行了研究,并对参与BBSV复制的未折迭蛋白反应(Unfolded protein response, UPR)和相关的寄主因子进行了探究。首先,通过激光共聚焦显微镜(CLSM)观察到BBSV侵染的本生烟中内质网(ER)形成了聚集体,同时透射电子显微镜(TEM)观察发现感染BBSV的细胞中内质网发生了重塑,形成了交迭卷曲状结构,并且内质网膜凹陷形成了很多小泡结构(spherules)。利用双分子荧光互补实验(BiFC)也证实BBSV p23-p82复合体可以特异的与ER聚集体共定位。此外,利用免疫胶体金分别检测BBSV的复制辅助蛋白p23以及dsRNA中间体,结果表明p23可特异的定位在ER膜上以及小泡结构上,而dsRNA可以在小泡结构上被特异的检测到。以上结果说明,BBSV侵染本生烟后形成的内质网小泡结构是BBSV的复制场所。将p23蛋白在本生烟叶片中瞬时表达,CLSM观察结果显示表达p23的细胞中伴随有ER聚集体的形成,且与p23蛋白共定位。进一步TEM观察结果表明p23的表达能够引起ER发生卷绕和聚集。与此相反,在本生烟中表达BBSV编码的其他蛋白并没有看到ER发生上述类似的形态变化。说明p23蛋白是BBSV侵染过程中诱导内质网膜重塑的关键蛋白,但单独表达p23并不能诱导形成类似病毒侵染的复制小泡结构。通过膜浮选实验(membrane flotation assay)和构建p23缺失突变体证明p23蛋白是膜锚定蛋白,其N端的跨膜区不仅对于p23的内质网定位有决定性作用,而且对于其重塑内质网的能力也是必需的。本文还利用电子断层成像和叁维重构技术对BBSV的复制场所进行了叁维重构和渲染,这在植物病毒中尚属首次报道,与已报道的动物病毒在内质网上形成复制场所的叁维结构相比,有其自身的特点。通过叁维重构结果发现,病毒的复制小泡和胞质能够通过一个直径约5-7nm的小管相连通。另外,病毒诱导形成的泡包(vesicle packets)之间也是可以连通的。此外,我们也对复制泡中的丝状结构进行了叁维渲染,结果显示其形态呈现多样性。BBSV复制场所的叁维结构不仅为研究BBSV的复制提供了新的视野,也为研究其他病毒的复制场所提供了有价值的参考。本研究中,无论是通过PVX病毒载体还是35S启动子表达p23蛋白都能够引起本生烟注射叶片发生坏死,而这种细胞坏死作用可以通过过表达BiP蛋白来抑制,说明p23过表达引起的细胞坏死与寄主的未折迭蛋白反应(UPR)存在相关性。Northern blot分别检测BBSV侵染本生烟后不同时间点6个不同UPR相关基因(bZIP60, BiP, PDI, CRT, CAM和SKP1)的表达水平,结果表明不同UPR基因的表达调控呈现时间依赖性。利用TRV-VIGS沉默UPR通路的关键基因bZIP60后,BBSV在本生烟中的积累量发生明显下降,且BBSV侵染细胞中形成的内质网聚集体数量明显减少,说明UPR在BBSV侵染过程中发挥重要作用,对维持病毒正常侵染是必须的。这也是植物病毒中首次报道病毒复制辅助蛋白可以诱发UPR。最后,对BBSV复制过程中所需的寄主因子进行了研究,初步结果表明BBSV的侵染可以诱导热激蛋白Hsp70和Hsp90表达量的升高,而下调Hsp70和Hsp90的表达后能够严重影响BBSV在本生烟中的复制。后续利用BiFC和GST pull-down实验证明p23蛋白能够分别与Hsp70和Hsp90直接互作,说明Hsp70和Hsp90直接参与了BBSV病毒RNA的复制。关于Hsp70和Hsp90如何参与BBSV的复制还有待于后续的深入研究。(本文来源于《中国农业大学》期刊2015-06-01）
蒲志超,谢伟勇,王延斌,薛剑,张兴世[10]（2015）在《骨形态发生蛋白7腺病毒基因转染对骨髓基质干细胞生物学功能的影响》一文中研究指出背景:基因转染技术正积极地应用于组织再生治疗之中,研究表明骨形态发生蛋白7具有骨诱导特性,可以有效促进成骨细胞的发育以及新骨的形成。目的:探讨骨形态发生蛋白7腺病毒基因转染对骨髓基质干细胞生物学功能的影响。方法:分离、培养羊骨髓基质干细胞,利用重组骨形态发生蛋白7腺病毒(adenovirus bone morphogenetic protein 7,Adeno-BMP7)对第2代骨髓基质干细胞进行基因转染,透射电镜观察转染后细胞超微结构。流式细胞仪检测转染后的细胞周期,Western blot检测骨形态发生蛋白7的表达,Von Kossa染色观察钙结节形态情况。取转染后第3天及相应未转染的骨髓基质干细胞制备珊瑚-细胞复合物,于裸鼠脊柱两侧背部皮下注射4周和8周后进行大体观察和组织学检测。结果与结论:体外细胞超微结构观察可见Adeno-BMP7基因转染骨髓基质干细胞存在活跃的物质合成代谢;流式细胞仪检测发现转染不会对骨髓基质干细胞的细胞周期产生明显影响;Western blot检测转染后的骨髓基质干细胞存在骨形态发生蛋白7蛋白的表达;Von Kossa染色可见转染Adeno-BMP7后的骨髓基质干细胞形成较大的钙结节。经裸鼠皮下回植实验发现,Adeno-BMP7转染后骨髓基质干细胞的成骨能力和成骨质量明显提高。以上结果表明经Adeno-BMP7转染可以有效促进骨髓基质干细胞成骨分化。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年06期）
病毒形态发生论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)均为骨修复过程中必不可少的细胞因子,利用慢病毒转染干细胞研究双因子作用下细胞的生物学改变具有重要意义。目的:探讨慢病毒介导人BMP-2和人VEGF-165双基因转染(2次转染)骨髓间充质干细胞的可行性以及转染后细胞的诱导成骨性能。方法:将骨髓间充质干细胞分为4组:(1)未转染组;(2)空载组:通过2次相同感染复数的空载慢病毒转染细胞;(3)BMP-2组:转染了单个目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP);(4)BMP-2/VEGF-165组:通过2次转染后携带双目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP,Lv-VEGH-165/RFP)。转染后不同时间点Western Blot检测目的蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖活性,转染后14 d检测各组细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)空载组、BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组在荧光显微镜下均可见相应的绿色及红色荧光蛋白表达;(2)转染后3 d,BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组均有相应目的蛋白高表达;转染后7,14,21 d,目的蛋白检测无明显变化(P>0.05);(3)BMP-2/VEGF-165组增殖稍快于BMP-2组(P<0.05),BMP-2组明显快于未转染组、空载组(P<0.05);(4)BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组碱性磷酸酶活力明显高于未转染组、空载组;(5)结果表明,慢病毒介导的h BMP-2和h VEGF-165双基因经2次转染成功转入兔骨髓间充质干细胞内,并长期稳定表达,该双因子的表达能通过刺激细胞碱性磷酸酶生成促使细胞更好的向成骨细胞分化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒形态发生论文参考文献
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标签：慢病毒; 骨髓间充质干细胞; 骨形态发生蛋白2; 血管内皮生长因子165;