BDSF抑制白念珠菌生物膜的形成

论文摘要

白念珠菌是一种极其重要的条件致病真菌,白念珠菌可形成生物膜,极大的增强了其抗药性,是临床上的一大难题。本实验中通过显微镜观察的方法,检测了cis-BDSF和trans-BDSF在体外对于白念珠菌的生长、出芽以及生物膜形成的影响。通过静置微孔板法构建白念珠菌生物膜模型,利用XTT法定量测定在白念珠菌生物膜生长的不同时间加入不同浓度的cis-BDSF和trans-BDSF对白念珠菌生物膜形成的抑制作用,并且通过显微镜观察其对生物膜结构和形成的影响,northern杂交检测cis-BDSF和trans-BDSF处理过的生物膜中菌丝特异性基因HWP1的表达变化。结果显示300μM的cis-BDSF和trans-BDSF均可抑制白念珠菌酵母相的生长,出芽抑制率可达70%。在0小时和1小时时加入300μM的cis-BDSF和trans-BDSF,对于生物膜的抑制率均可达90%（0小时）和60%（1小时）,显著高于法尼醇和DSF。然而,四种药均不能对已经形成的生物膜造成影响。Northern杂交结果表明cis-BDSF和trans-BDSF可下调HWP1的表达。实时荧光定量分析同样显示经60μM的cis-BDSF和trans-BDSF处理,白念珠菌生物膜模型中HWP1和ALS3的表达量分别下调约90%（cis-BDSF）和70-80%（trans-BDSF）,证明在生物膜形成早期（0或1小时）加入cis-BDSF和trans-BDSF可以显著抑制白念珠菌生物膜的形成,低浓度（3μM、30μM和60μM）时主要通过抑制其形态转变及菌丝相的附着实现的,而高浓度（300μM）时则通过抑制形态转变和菌丝相附着以及酵母相的生长的联合作用实现的。Cis-BDSF和trans-BDSF作为可能的治疗方法值得进行进一步研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 绪论
• 一、群体感应
• 1. 细菌中群体感应的概念
• 2. 白念珠菌中的群体感应
• 3. 可干扰白念珠菌的群体感应信号分子
• 二、白念珠菌的形态转变
• 1. 二氧化碳感应
• 2. 群体感应及其在白念珠菌形态发生中的作用
• 3. pH值对形态转变的调控
• 三、白念珠菌的生物膜特性
• 1. 生物膜的基本概念
• 2. 白念珠菌生物膜的生长动力学
• 3. 影响白念珠菌生物膜的因素
• 4. 白念珠菌生物膜形成相关基因
• 5. 生物膜的定量检测方法
• 四、白念珠菌的致病性
• 1. 白念珠菌致病性的影响因素
• 2. 白念珠菌的耐药性
• 3. 念珠菌病的一般治疗方法
• 材料与方法
• 一、实验材料
• 1. 化合物
• 2. 菌种
• 3. 培养基和缓冲液
• 4. 试剂盒
• 5. 仪器
• 二、实验方法
• 1. 菌种的培养
• 2. BDSF对白念珠菌芽管形成的影响
• 3. BDSF对白念珠菌酵母相细胞生长的影响
• 4. BDSF对白念珠菌生物膜形成的影响
• 5. BDSF对已形成的白念珠菌生物膜的影响
• 6. 数据处理和显著性分析
• 7. Northern杂交分析BDSF处理后生物膜基因表达的变化
• 8. 实时荧光定量RT-PCR分析BDSF处理后生物膜基因表达的变化
• 结果
• 1. BDSF抑制白念珠菌芽管的形成及其酵母相的生长
• 2. BDSF可抑制白念珠菌芽管生物膜的形成
• 3. Northern杂交分析BDSF处理后生物膜基因表达的变化
• 4. 实时荧光定量RT-PCR分析BDSF处理后生物膜基因表达的变化
• 讨论
• 参考文献
• 致谢