鸡肉中氟喹诺酮类残留MSPD-HPCE检测方法研究

论文摘要

氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones,FQs）是一类人工合成的抗菌药,已被世界各国广泛用于畜禽和水生动物疾病的防治。由于药物的不合理使用,会造成动物可食性组织中残留,除了本身具有毒副作用外,还会产生耐药性,严重损害人体健康,因此建立快速、高效、灵敏的氟喹诺酮类药物多残留检测技术具有重要意义。本研究建立了同时检测鸡肉中洛美沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、培氟沙星多残留的基质固相分散萃取法-高效毛细管电泳（HPCE）法及液相-质谱联用（LC-MS）验证方法,结果如下:1高效毛细管电泳检测FQs标准方法的建立实验通过正交试验对电泳缓冲液的离子浓度、缓冲液pH值、分离电压和分离温度等电泳条件进行了考察,建立了同时分离检测洛美沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和培氟沙星等4种FQs的HPCE法。电泳缓冲溶液:35 mmol/L硼砂缓冲液（pH 8.8）;电压:22kV;温度:25℃:进样压力:0.8psi;进样时间:10s;内径75μm×60cm未涂层熔融石英毛细管柱,上述4种药物在7分钟内达到基线分离。4种药物浓度在0.5～20μg/g时与其峰面积呈良好的线性关系。线性方程和相关系数为洛美沙星:C=2014.1S-104.47（R=0.9993）、氧氟沙星:C=3016S+61.316（R=0.9994）、恩诺沙星:C=1319.1S-122.69（R=0.9990）、培氟沙星:C=2696.1S-524.52（R=0.9996）。2鸡肉中FQs样品前处理方法的建立建立了3种样品前处理方法:液-液萃取、固相萃取和基质固相分散萃取法,并对这3种方法进行比较,优化后的样品前处理方法为基质固相分散萃取法。液-液萃取法:氟喹诺酮类药物不同的组织样品处理中多采用有机溶剂和磷酸盐提取目标化合物。本实验考察了磷酸盐缓冲液、乙腈、NaOH/乙腈和醋酸/乙腈对鸡肉样品中4种药物的提取效果,结果表明,乙腈具有较强的蛋白沉淀效果,4种药物的回收率为79.2%～107.07%,能够满足检测要求。固相萃取法:对乙腈、甲醇、正己烷、4%氨水/甲醇、二氯甲烷等不同洗脱剂进行了筛选,发现4%氨水甲醇洗脱效果最好。鸡肉样品中4种FQs的回收率在77.66%～90.59%。基质固相分散萃取法:通过考察淋洗剂种类、洗脱剂种类、洗脱剂量等对鸡肉组织中4种氟喹诺酮类抗菌药效果的影响,建立了鸡肉中氟喹诺酮类抗菌药基质固相分散萃取法,测定4种药物的回收率为81.46%～93.39%,得到满意结果。3种方法的回收率＞70%,液-液萃取法处理的干扰物质多,对目标物的定量有影响;固相萃取法操作较复杂,回收率稍低于基质固相分散萃取法;基质固相分散萃取法处理样品比较纯净,在操作中既简便又节省时间。综合考虑回收率和操作简易程度,确定基质固相分散萃取法为样品的前处理方法。并对建立的MSPD法进行考证,4种药物的回收率为79.5～91.6%。3鸡肉中FQs多残留的MSPD-HPCE检测方法的建立利用优化后的MSPD—HPCE对实际样品进行检测,测得鸡肉样品中残留浓度洛美沙星为1.219μg/g、氧氟沙星为1.045μg/g、恩诺沙星为0.961μg/g、培氟沙星为3.401μg/g。四种药物的最低检测限范围为51μg/kg～100μg/kg。4 LC-MS对MSPD-HPCE方法的验证液相色谱条件:色谱柱（2.1mmI.D×150mm）,流动相:0.1%甲酸溶液-乙腈,梯度洗脱,在0至7.0min内乙腈体积分数从20%线性增加到70%并保持至10min,在10.1min时乙腈体积分数改至20%并平衡10min,流速0.2 mL/min,柱温35℃,进样量2μL。质谱条件:离子化模式:ESI（+）;鞘气:氮气,流速:0.75 L/m in;辅助气:氮气,流速:0.15 L/min;离子源喷射电压:4.5kV;毛细管温度:180℃;毛细管电压:13 kV:碰撞气:氦气;多级全扫描质谱。获得了各化合物的二级质谱信息,发现氟喹诺酮类化合物在正离子检测方式下可生成脱CO2、脱H2O等碎片,这信息都可以用于氟喹诺酮类化合物的定性分析,验证了MSPD-HPCE法的准确性。试验结果表明:本研究建立鸡肉中洛美沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和培氟沙星多残留同时检测法——基质固相分散萃取-毛细管电泳法（MSPD—HPCE）,该检测法灵敏度高,精密度好,达到了氟喹诺酮类药物残留分析的要求,该方法的建立对于监控四种药物在动物源性食品中的残留,准保人们的健康,具有重要的理论和实践意义。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 本文常用英文缩写词
• 文献综述
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 溶液的配制
• 2.3 氟喹诺酮类药物的色谱分离条件
• 2.3.1 HPCE条件的设定
• 2.3.2 LC-MS条件的优化
• 2.4 鸡肉中FQs样品前处理方法的建立
• 2.4.1 液—液萃取
• 2.4.2 固相萃取法
• 2.4.3 基质固相分散萃取法
• 2.5 鸡肉中FQs残留不同前处理方法
• 2.5.1 液—液萃取
• 2.5.2 溶剂提取—固相萃取
• 2.5.3 基质固相分散萃取技术
• 2.5.4 鸡肉样品前处理方法的比较
• 2.6 HPCE方法的评价
• 2.6.1 选择性的考察
• 2.6.2 样品定性方法与定量方法
• 2.6.3 方法准确度的测定
• 2.6.4 方法精密度的测定
• 2.6.5 标准曲线与线性范围的确定
• 2.6.6 方法的灵敏度
• 2.7 结果计算
• 3 结果与分析
• 3.1 氟喹诺酮类药物HPCE标准方法的建立
• 3.1.1 HPCE分离条件的选择
• 3.1.2 正交试验设计
• 3.2 鸡肉中FQs多残留样品前处理方法的建立
• 3.2.1 液—液萃取方法的建立
• 3.2.2 固相萃取方法的建立
• 3.2.3 基质固相分散萃取方法的建立
• 3.3 鸡肉中FQs多残留3种前处理方法的比较
• 3.3.1 不同方法回收率的比较
• 3.3.2 不同前处理方法色谱的比较
• 3.4 鸡肉中FQs残留检测方法及确证方法建立
• 3.4.1 鸡肉中FQs残留MSPD-HPCE方法的建立
• 3.4.2 FQs液相/质谱验证方法的建立
• 3.5 鸡肉样品中氟喹诺酮类药多残留测定
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录A
• 附录B
• 附录C
• 致谢
• 作者简介