胂酸基乙酸对在体肿瘤的抑制及体外促分化作用

论文摘要

上世纪70 年代Sachs 率先提出了“分化治疗”的概念,80 年代中期我国学者首创全反式维甲酸（ATRA）诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）获得成功,显著提高了患者生存质量。诱导恶性肿瘤细胞向正常细胞表型分化与诱导细胞凋亡一样,都是肿瘤治疗的新途径。胂酸基乙酸（ASAC）体外研究表明,其诱导肿瘤细胞的凋亡能力强于三氧化二砷（As2O3）。为了进一步了解ASAC 抗肿瘤作用的机理,在检测ASAC 体内毒理的基础上,进一步体外测定了ASAC 促细胞分化效果。研究ASAC 的急性毒性反应,分别以两种给药方式——静脉注射和灌胃,测定了ASAC 的半致死剂量LD50。设计以H22 人肝癌细胞接种肿瘤小鼠为在体模型,根据急性毒性结果,观察不同给药方式的ASAC 对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用。通过对组织切片病理学分析,测定ASAC 对小鼠脏器组织及肿瘤组织的影响。在体内研究的基础上,ASAC 体外作用于分化敏感细胞株人原粒细胞白血病HL-60,MTT 法观察ASAC 对HL-60 细胞的影响,以细胞的形态、吞噬能力、碱性磷酸酶活力及硝基蓝四氮唑（NBT）还原反应能力等指标来评估HL-60 细胞的分化效果。同时,作用于H22 肝癌小鼠细胞,测定ASAC 对肝癌细胞的促分化效果。体内实验结果显示,静脉注射给药方式的ASAC 的LD50 为727.78mg/kg,灌胃的LD50 为1342.76mg/kg,其毒性远远低于三氧化二砷;ASAC 的两种给药方式对荷H22 小鼠肿瘤均有明显的抑制作用,且静脉注射的抑瘤率高于灌胃的抑瘤率;病理学分析表明,给予ASAC 的小鼠的肿瘤组织大面积坏死,各脏器病理检查,除高剂量ASAC 组肝细胞有明显的颗粒样变性外,其它脏器并无明显损伤。体外实验结果表明,ASAC 明显地抑制了HL-60 和H22 细胞的增殖,当ASAC的浓度为10-6 mol/L 时,促细胞成熟的能力较明显,且伴随着吞噬能力、碱性磷酸酶活力及NBT 还原能力的增加。综上所述,ASAC 大大降低了传统砷剂的毒性,有效地诱导肿瘤细胞向成熟细胞分化。ASAC 诱导肿瘤细胞分化及抗癌作用的效价强度比一些细胞毒抗癌药物低,但是由于ASAC 毒性低,可尝试加大剂量来提高疗效。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 1 绪论
• 2O₃ 的毒性作用'>1.1 As₂O₃的毒性作用
• 2O₃ 的应用'>1.2 As₂O₃的应用
• 2O₃ 治疗早幼粒细胞性白血病（APL）'>1.2.1 As₂O₃治疗早幼粒细胞性白血病（APL）
• 2O₃ 的抗肝癌作用'>1.2.2 As₂O₃的抗肝癌作用
• 2O₃ 对其它实体瘤的增殖抑制作用'>1.2.3 As₂O₃对其它实体瘤的增殖抑制作用
• 2O₃ 抗肿瘤作用机制'>1.3 As₂O₃抗肿瘤作用机制
• 1.3.1 细胞毒作用
• 1.3.2 诱导分化
• 1.3.3 促凋亡
• 1.3.4 抑制增殖
• 1.4 本文的主要研究内容
• 1.5 预期达到的目标
• 2 胂酸基乙酸（ASAC）的急性毒性实验
• 2.1 实验目的
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 实验药物
• 2.2.2 实验动物
• 2.2.3 实验仪器
• 2.3 急性毒性实验的预实验
• 2.3.1 静脉注射（i.v）给药方式的急性毒性实验的预实验方法
• 2.3.2 灌胃（i.g）给药方式的急性毒性实验的预实验方法
• 2.3.3 预实验结果
• 2.4 急性毒性实验
• 2.4.1 实验方法
• 2.4.2 急性毒性实验结果
• 2.5 讨论
• 3 胂酸基乙酸（ASAC）对荷 H22 小鼠肿瘤的抑制作用
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 H22 肝癌细胞的复苏和培养
• 3.2.2 小鼠H22 腹水瘤模型的建立
• 3.2.3 小鼠H22 实体瘤模型的建立
• 3.2.4 荷瘤小鼠体内实验
• 3.3 移植瘤抑制的实验结果
• 3.3.1 灌胃给药方式的ASAC 对荷瘤小鼠实体瘤抑制实验
• 3.3.3 静脉注射给药方式的ASAC 对荷瘤小鼠实体瘤抑制实验
• 3.4 讨论
• 4 移植瘤及脏器组织病理学分析
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 ASAC 对移植瘤组织病理学作用
• 4.2.2 ASAC 对荷瘤小鼠心、肝、脾、肾组织的毒性作用
• 4.2.3 ASAC 作用下荷瘤小鼠心、肝、脾、肾组织的脏器指数的变化
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 移植瘤组织病理学观察
• 4.3.2 各主要脏器的病理检查
• 4.3.3 各脏器指数的变化结果
• 4.4 讨论
• 5 MTT 法检测药物作用后细胞的存活和生长
• 5.1 实验原理
• 5.2 实验材料
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 小鼠肝癌细胞株H22 的复苏培养与传代培养
• 5.3.2 人急性原粒细胞白血病细胞株HL-60 的稳定培养与传代培养
• 5.3.3 药物作用下的细胞活力检测:MTT 法
• 5.4 实验结果
• 5.5 讨论
• 6 药物作用下细胞的形态学的变化
• 6.1 实验材料
• 6.2 实验方法
• 6.2.1 人急性原粒细胞白血病细胞株HL-60 在药物作用下的形态学变化:瑞氏-姬姆萨染色法（Wright-Giemsa’s stain）
• 6.2.2 小鼠肝癌细胞H22 在药物作用下的核质比的变化
• 6.3 实验结果
• 6.3.1 瑞氏-姬姆萨染色HL-60 在药物作用下的形态学变化
• 6.3.2 H22 细胞在药物作用下的核质比的变化
• 6.4 讨论
• 7 药物作用后的 HL-60 细胞吞噬能力的实验
• 7.1 实验仪器及主要实验药品
• 7.2 人急性原粒细胞白血病细胞株HL-60 在药物作用下的吞噬活力的测定
• 7.3 实验结果
• 7.4 讨论
• 8 碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase, ALP）活力测定
• 8.1 实验原理
• 8.2 实验仪器及主要药品
• 8.3 实验方法
• 8.4 实验结果
• 8.4.1 小鼠肝癌H22 细胞在药物作用下的碱性磷酸酶ALP 活力的变化
• 8.4.2 人急性原粒细胞白血病细胞株HL-60 在药物作用下的碱性磷酸酶活力的变化
• 8.5 讨论
• 9 硝基蓝四氮唑（NBT）还原反应
• 9.1 实验药品及仪器
• 9.2 实验方法
• 9.3 实验结果
• 9.4 讨论
• 9.5 小结
• 10 研究结论及后续工作建议
• 10.1 本课题研究的主要结论
• 10.2 后续工作及其展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录 作者在攻读硕士学位期间发表的文章
• 独创性声明
• 学位论文版权使用授权书