利用体外细胞共培养模型研究子宫内膜异位症的血管生成

论文摘要

研究目的1、建立子宫内膜异位症子宫内膜基质细胞（ESC）、脐带静脉血管内皮细胞（HUVEC）体外共培养模型。2、应用该模型,观察内异症患者（研究组em）及非内异症患者（对照组con）。ESC与HUVEC共培养后,细胞运动、迁移的微观行为,比较细胞共培养后行为的差异。3、用建立的模型探讨p雌二醇（E）、孕酮（P0）、血管内皮生长因子（VEGF）对.ESC与HUVEC共培养后HUVEC细胞运动的影响。方法1、取组织分离培养原代ESC和HUVEC2、设计制备二甲基硅氧烷（PDMS）章3、利用双孔道同时接种同一种细胞,进行愈合实验分别观察ESC、 HUVEC生长速度的差异。4、em及con组的ESC和HUVEC共培养并免疫荧光标记,24小时拍照,比较两组共培养体系中HUVEC生长差异。5、用含有不同浓度E、 PO、 VEGF的培养基培养共培养体系,并免疫荧光标记,24小时拍照,比较两组共培养体系中HUVEC生长差异。结果1、当孔道宽400μm时,孔道间距800um, ESC密度5X106/1、 HUVEC密度5×106/1时在孔道内生长良好,2小时可贴壁牢固,揭膜后图案化好。2、模型设计当愈合孔道宽度2001μm时,19小时HUVEC完全愈合；ESC未完全愈合（em及con无明显差异）；3、ESC与HUVEC共培养后,HUVEC条带靠近ESC一侧细胞密度高。4. ESC-HUVEC共培养体系中,较HUVEC单独培养,]HUVEC生长速度快（P<0.05）; ESCem-HUVEC共培养体系中,较ESCcon-HUVEC共培养体系,HUVEC生长速度快（P<0.05）。5、 ESC-HUVEC共培养体系中,1)p雌二醇浓度为2.Onmol/l,HUVEC生长加快（P<0.05）；添加雌激素各组间,浓度与HUVEC生长成正相关（P<0.05）；2)孕酮浓度为30nmol/1,70nmol/1,HUVEC生长减慢（P<0.05）；添加孕激素各组间,浓度与HUVEC生长成负相关（P<0.05）；3) VEGF750pg/ml,HUVEC生长加快（P<0.05）；添加VEGF各组间,浓度与HUVEC生长成正相关（P<0.05）；4)p雌二醇浓度为0.2nmol/1,有抑制HUVEC生长现象（P<0.05）。结论：1、成功建立了子宫内膜异位症体外血管生成的细胞共培养模型,模型较为稳定,可操作性强；2、通过共培养模型的研究,子宫内膜基质细胞对脐带静脉血管内皮细胞的生长有诱导作用；研究组的诱导作用强于对照组；3、共培养体系中,高浓度p雌二醇、血管内皮生长因子促进脐带静脉血管内皮细胞生长、高浓度孕酮浓度为抑制脐带静脉血管内皮细胞生长；低浓度p雌二醇抑制脐带静脉血管内皮细胞生长。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一部分 子宫内膜基质细胞、脐带静脉血管皮细胞共培养模型的建立
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 内异症组与对照症组共培养体系中细胞迁移的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 雌、孕激素及VEGF对共培养体系中细胞迁移影响的探讨
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢