肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及去甲基化肺癌细胞生物学行为和p16基因转录的研究

论文摘要

目的研究非小细胞肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化及其临床意义;观察不同浓度去甲基化剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理人肺癌细胞株A549后,观察其基因启动子区甲基化状态,并探讨诱导A549细胞株甲基化失活的pl6基因重新表达的可能性。方法选择120例非小细胞肺癌患者,用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测其肺癌组织、癌旁正常组织和外周血血浆p16基因的甲基化,并用同样的方法对120例正常对照组血浆样品进行p16基因甲基化检测,各组检测结果进行比较。运用甲基化特异性聚合酶链反应法（MSP）检测人肺癌细胞株A549的p16基因甲基化状态,分别用含5-Aza-CdR浓度为5×10-6、1×10-6、5×10-7和1×10-7的培养基处理人肺癌细胞株A549,MSP法检测用药前后细胞中p16基因的甲基化状态,RT-PCR方法检测用药前后细胞中p16基因mRNA的转录水平;MTT法绘制细胞生长曲线;以及软琼脂培养克隆形成实验检测细胞的生长活力。结果肺癌组织p16基因甲基化率44.2%,高于癌旁组织的11.7%（P<0.01）;非小细胞肺癌患者血浆样品中p16基因甲基化检测率为32.5%,对照组血浆未检测到p16基因甲基化（P<0.01）;肺癌患者血浆样品与癌组织p16基因甲基化检出率比较差异无显著性（P>0.05）;患者血浆样品与癌旁组织p16基因甲基化检出率比较差异有显著性（P<0.01）;女性患者的p16基因甲基化检出率为22.22%,与男性患者的检出率48.04%比较无显著性差异（P>0.05）;在年龄分组中,年龄大于等于60岁患者的甲基化检出率为53.85%,高于60岁以下患者的检出率32.73%,相比较有显著性差异（P<0.05）。A549细胞经不同浓度5-Aza-CdR刺激后与对照组相比,生长速度明显减慢,克隆形成率明显降低,p16基因启动子区甲基化状态经过5-Aza-CdR处理后,启动子区去甲基化。结论肺癌患者癌组织和血浆样本p16基因甲基化的检测都为肺癌的早期筛查和诊断提供了有价值的参考信息。启动子区异常甲基化是人肺癌细胞株p16基因失活的可能原因, 5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态,5-Aza-CdR有可能作为肺癌治疗的有效药物。

论文目录

• 英文缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 研究之一:肺癌患者癌组织和血浆 p16 基因甲基化的检测及其临床意义
• 中英文摘要
• 引言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 研究之二:去甲基化肺癌细胞生物学行为和 p16 基因转录研究
• 中英文摘要
• 引言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献