论文摘要
目的1.本实验在人类腺样囊腺癌组织学标本中寻找并确认血管生成拟态结构,明确其与病理学分型的关系及其表达的意义。2.观察被肿瘤干细胞标记相关蛋白CD44v6,CD133,ABCG2标记的标本在人类腺样囊腺癌组织学标本中的表达,分析比较血管生成拟态与其之间的相关性,为该肿瘤易于局部复发提供新的解释。3.从细胞水平再次进行形态学观察,明确血管生成拟态结构在人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中存在,并观察肿瘤干细胞标记相关CD44v6,CD133,ABCG2在人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中的表达。为进一步肿瘤干细胞的提取及分析VM生成的机制打下基础。方法1.本实验收集天津医科大学第二医院1999年1月-2009年3月间手术切除的符合实验条件的泪腺腺样囊腺癌组织标本33例。将所有标本统一进行重新切片经HE染色后观察确认病理诊断及分型。通过CD31/PAS双重染色后在光学显微镜下对比观察切片,在人泪腺腺样囊腺癌组织标本中寻找并确认VM结构。同时应用二步法免疫组织化学检测33例标本中CD44v6、CD133和ABCG2的表达情况。2.根据VM结构在泪腺腺样囊腺癌中的观察情况,应用统计学方法比较其在不同病理分型中的表达以及在VM表达组与非表达组肿瘤干细胞标记相关蛋白CD44v6, CD133, ABCG2的表达有无差异。3.通过人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞系由北京医科大学口腔医院李盛霖中心实验室馈赠)二维培养及三维培养,观察血管生成拟态及肿瘤干细胞标记相关蛋白CD44v6, CD133, ABCG2在细胞系SACC-83中的表达。结果1.33例标本经观察HE染色切片,并结合免疫组织化学结果确诊为泪腺腺样囊腺癌,其中实体型13例（39.39%）,腺样-管状型20例（60.61%）。通过CD31/PAS双重染色方法观察,在10例标本中发现了VM结构,出现率为30.3%。,实体型6例（46.2%）,腺样-管状型4例（20.0%）,二者差异不具有统计学意义（p=0.346）。2.所观察到的VM均由腺样囊腺癌细胞围绕形成管状、裂隙状结构,该腔隙结构内可见红细胞,这些红细胞结构完整,且周围没有出血灶存在。此外还观察到部分瘤细胞胞浆内分泌大量PAS阳性物质及CD31阳性物质。在VM表达组与非表达组CD44v6的表达分别为1.57%与2.51%,二者具有统计学差异（p=0.023）。3.33例标本应用免疫组织化学的方法观察肿瘤干细胞相关标志蛋白CD44v6,CD133, ABCG2的表达情况分别为：CD44v6阳性表达率为54.5%（18/33）。实体型阳性率76.9%（10/13）,腺样-管状型阳性率为40.0%（8/20）,二者差异具有统计学意义（p=0.037）。CD133阳性表达率为57.6%（19/33）,在实体型和腺样-管状型中分别为76.92%（10/13）、45%（9/20）,差异不具有统计学意义（p=0.070）；表达产物定位于细胞膜和细胞浆,呈淡黄色至棕褐色,部分病例同时表达于胞浆和胞核。ABCG2阳性表达率为21.2%（7/33）,在实体型和腺样-管状型中分别为30.8%（4/13）、15.0%（3/20）,差异不具有统计学意义（p=0.297）;ABCG2阳性表达细胞具有沿血管分布的倾向。4.在涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83的二维培养中,可见细胞呈环状,网状生长,三维培养中呈腔状、管状生长。在三维培养中可见VM阳性表达。肿瘤干细胞相关蛋白在人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中,可见CD44v6表达率为42.47±7.37%,CD133表达率为56.56±10.27%,ABCG2表达率为2.94±1.23%。结论1.人泪腺腺样囊性癌及人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中均有VM结构表达2.人泪腺腺样囊性癌的病理分型对VM的表达并无直接影响,而CD44v6则与其分型有关；3.人泪腺腺样囊性癌中VM与CD44v6的表达有关,提示不仅VM与人泪腺腺样囊性癌的转移复发有关,而且CD44v6可能影响VM的生成。4.人泪腺腺样囊性癌及人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中可不同程度的表达肿瘤干细胞相关标志蛋白CD44v6、CD133、ABCG2,提示人泪腺腺样囊性癌中可能存在肿瘤干细胞；