低分子量玉米功能肽的分离纯化及其生理活性的研究

论文摘要

活性氧是微生物细胞在正常代谢过程中产生的一类化学性质极其活泼的基团分子,主要包括超氧自由基（O2-）、过氧化氢（H2O2）和羟基自由基（OH·）。自由基是游离存在的、带有不成对电子的分子、原子或离子,其化学性质很活泼。在生物体内它们虽然不断在产生,但也不断地被清除。在生理条件下,处于平衡状态的自由基浓度是极低的。它们不仅不会损伤机体,而且还可显示其独特的生理作用。在病理情况下,环境物理因素或外源性化学物质直接或间接诱导产生的自由基得不到及时清除,或者内源性自由基的产生和清除失去了正常平衡,常常会造成自由基对机体的损伤。有大量事实表明,多种疾病都与氧自由基及其衍生物有关系。在癌症的发生和发展中,每个阶段都有自由基的产生和参与,另外在癌的治疗过程中也都有自由基的参与,因此可以说自由基和癌关系极为密切;有研究表明,自由基对细胞凋亡也有一定的影响,认为活性氧自由基可能就是细胞程序性死亡的介质或传递器。另外氧自由基还能够引起糖尿病、自身免疫疾病等其它疾病。正是由于自由基对机体的毒害作用,使得清除氧自由基及其衍生物就变得十分必要。因此,抗氧化剂的筛选和研究就变的十分重要。近年来,生物活性肽的研究日益受到人们的重视,人们以动物、植物、微生物等通过酶解等物理化学方法分离制备出各种生物活性肽,生物活性肽与传统药物相比,具有易吸收,抗原性小,口感好等优点。我国的玉米加工生产还处于粗放型生产状态,主要集中在玉米淀粉、饲料、玉米蛋白粉等一些初级产品上,产值低,设备简单,工艺落后,科技含量不够。为了促进玉米深加工,进一步提高玉米产品的附加值,延长玉米深加工产业链和实现玉米的高附加值转化,本文在玉米肽的制备、分离、纯化和生理活性等方面开展了以下研究:1、本文以玉米加工生产玉米淀粉的副产物玉米蛋白粉（俗称黄粉子）为原料,首先从玉米蛋白粉中提取醇溶蛋白,然后以醇溶蛋白为底物,采用一种碱性蛋白酶,在50℃、pH为8.0时进行酶解,酶解产物再经过一系列的分离纯化,真空冷冻干燥后得到淡黄色粉状物—玉米肽。2、研究了玉米肽的抗氧化作用,这种从植物蛋白中分离出来的生物活性小肽在不同检测系统均可表现不同程度的抗氧化功能及抗氧化能力,浓度为10mg╱ml时,其清除率达到74.36%,有明显的清除DPPH的作用。玉米肽可做为一种广泛的抗氧化剂。3、研究了玉米肽对ACE的抑制作用,其中当玉米肽的浓度为20mg/ml的时候,玉米肽对ACE的抑制率就高于40%,随玉米肽浓度的增大,对ACE的抑制率也逐渐增大。当玉米肽浓度达到100mg/ml的时候,对ACE的抑制率超过80%。从本试验可以看出,玉米肽以及它的分离纯化产物可以通过抑制ACE的活性来达到降血压的目的。4、采用MTT法研究了不同浓度的玉米肽对MCF-7细胞增殖及粘附纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN）能力的影响;采用细胞划痕法研究玉米肽对MCF-7细胞在FN迁移能力的影响。综上所述,本试验不仅制备了具有广泛应用的玉米肽,而且也证实了玉米肽具有抗高血压的作用和对MCF-7细胞增殖、MCF-7细胞在FN上粘附以及MCF-7细胞迁移具有一定的抑制作用,为玉米肽的进一步开发和应用提供了理论基础和实验依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 活性氧概述
• 1.2 生物活性肽
• 1.3 玉米肽概述
• 1.4 课题开展的目的和意义
• 2、材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 3、结果与分析
• 3.1 玉米肽的分离纯化实验
• 3.2 初步分离的玉米肽样品的理化性质
• 3.3 DPPH清除实验
• 3.4 玉米肽对血管紧张素转换酶（ACE）活性影响的实验
• 3.5 玉米肽细胞实验
• 4、讨论
• 4.1 关于玉米肽的分离纯化
• 4.2 关于玉米肽的抑制血管紧张素转换酶（ACE）活性的实验
• 4.3 关于玉米肽的细胞实验
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢