论文摘要
【目的】白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖（CAIBG）是一类生物反应调节剂（BRM），具有升白细胞、抗肿瘤、抗病毒等广泛的生物学活性，本研究前期实验已经成功地从白色念珠菌细胞壁中分离出CAIBG，并通过动物实验证实了CAIBG能对抗环磷酰胺（CTX）引起的免疫抑制作用，具有升高小鼠外周血中白细胞数的功能，而且能诱导外周血中IL-1β、TNF-α的升高，但其作用机理仍不十分清楚。本实验从白色念珠菌细胞壁提取不溶性β-葡聚糖（Candida albicans insolubleβ-glucan，CAIBG），观察CAIBG对小鼠脾脏TNF-αmRNA表达的影响，探讨其促进细胞因子分泌的机制及与升高外周血白细胞的相关性。【方法】首先从白色念珠菌细胞壁提取不溶性β-葡聚糖，小鼠腹腔内注射CAIBG后，分别于3小时、6小时、9小时、12小时、24小时检测小鼠脾脏TNF-αmRNA的表达，以确认小鼠脾脏TNF-αmRNA升高的高峰及衰退的时间点。雄性昆明种小鼠80只，随机分成四组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、CAIBG组。其中空白组不加任何处理，其它三组每天腹腔注射CTX 100mg／kg．d-1，连续三天，造成白细胞减少模型。从第四天开始，阴性对照组小鼠每天腹腔注射灭菌注射用水0.1ml／10g，阳性对照组小鼠每天腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子（瑞白）30μg／kg．d-1，CAIBG组每天腹腔注射自制CAIBG51.2mg／kg．d-1。每组小鼠分别于给药后第1、3、5、7天脱颈处死（每天给药后6小时），取脾脏约70g，加入无RNA酶的裂解液，用研钵磨碎冻存于-70℃冰箱中备用，解冻后用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测TNF-αmRNA。所有动物均于实验前、造模后第1天、第3天及处死前尾静脉取血计数外周血白细胞总数；动物处死后称重，计算脾脏、胸腺指数并常规进行病理学检查。【结果】CAIBG组小鼠外周血白细胞数较其它三组均显著升高；各组小鼠给药后，脾脏指数均增加，但CAIBG组脾脏指数较阳性对照组增加时间早，且给药第3天与阳性对照组有显著性差异（P＜0.05），从第5天开始，CAIBG组与阳性对照组差异无显著性（P＞0.05）；CAIBG组胸腺指数与空白对照组相比，胸腺指数减少，胸腺明显萎缩；与其它三组相比，差异无显著性（P＞0.05）；CAIBG给药后6小时，小鼠脾脏TNF-αmRNA表达明显增强，在给药第1、3、5、7天，CAIBG组较空白组、阴性对照组和阳性对照组均有明显增高（P＜0.05）；组织病理学检查示CAIBG组脾脏有髓外造血现象。【结论】CAIBG可能是通过诱导小鼠脾脏TNF-αmRNA在转录水平上的表达，升高外周血中TNF-α的含量，从而刺激机体白细胞的产生，这可能是白色念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖升高白细胞的重要机制之一，从而提示CAIBG是一种很有前途的生物反应调节剂，值得进一步研究和开发。
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标签：逆转录聚合酶链反应论文; 白色念珠菌论文; 不溶性葡聚糖论文; 白细胞论文; 生物反应调节剂论文;