人肝癌发生的蛋白质组学研究及ANXA4等蛋白质的表达与功能验证

论文摘要

人类肝癌是诊治困难、预后极差的一种恶性肿瘤，其发生发展是多因素参与的多环节的病理过程，传统的单基因研究模式限制了肝癌相关因素的研究发展。近年来迅速发展的蛋白质组学研究，能动态、整体、定量地考察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化，对于探讨疾病发病机理、寻找疾病诊断的特异性标志物和药物治疗的靶标来说，是一种有效的高通量的研究模式，可获得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物、新关键分子，极大地丰富了诊断标志物的选择组合及复杂致病机理的全面阐明。本研究运用蛋白质组学研究方法及手段，通过对人类正常肝组织、乙型肝炎组织、肝硬化肝组织、肝细胞性肝癌组织的全蛋白质组表达谱差异分析，筛选出了一些有潜在应用价值的差异蛋白质，对其中的差异分子annexins A4（ANXA4）、PeroxiredoxinⅡ（PrxⅡ）、PeroxiredoxinⅢ（PrxⅢ）在肝癌组织中进行表达验证，并采用RNA干扰技术以及癌发生相关生物学特性的鉴定方法对ANXA4进行了功能分析。 第一部分 人肝细胞性肝癌发生相关的蛋白质组学研究 本部分应用双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis，2-DE）结合基质辅助的激光解析离子化-飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption／ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）等蛋白质组学技术，对正常肝组织、乙型肝炎组织、肝硬化肝组织、肝细胞性肝癌组织的全蛋白质差异表达谱进行分析，筛查在肝癌发生过程中发挥重要作用的差异蛋白分子。 选择正常人肝组织（A组）5例，以及临床病理确定为乙型肝炎的肝组

论文目录

• 主要英文缩写
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 参考文献
• 第一部分 人肝细胞性肝癌发生发展相关的蛋白质组学研究
• 前言
• 材料与方法
• 1、材料
• 2、方法
• 结果
• 1、各组总蛋白2-DE图谱分析
• 2、差异蛋白质质谱鉴定结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 差异蛋白ANXA4、PrxⅡ、PrxⅢ的表达验证
• 前言
• 材料与方法
• 1、材料
• 2、方法
• 结果
• 1、ANXA4蛋白及mRNA在人正常肝、肝硬化、小肝癌组织中的差异表达验证
• 2、PrxⅡ、Ⅲ蛋白及mRNA在人正常肝、小肝癌组织中的差异表达验证
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第三部分 差异蛋白ANXA4的功能验证
• 前言
• 材料与方法
• 1、材料
• 2、方法
• 结果
• 1、RNA干扰片段的设计
• 2、载体的构建
• 3、annexins A4在干扰后表达下降
• 2+调节的影响'>4、annexins A4表达下降后,对细胞内Ca²⁺调节的影响
• 5、annexins A4表达下降后,对细胞凋亡的影响
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述 蛋白质组学在肝病研究中的应用进展
• 参考文献
• 附件
• 一、在读期间发表的论文
• 二、在读期间主持立项的科研课题
• 致谢