聚乙二醇修饰rhCH-2的药代动力学研究

论文摘要

本论文以与企业合作开发的聚乙二醇修饰rhCH-2（PEG-rhCH-2）为研究对象,初步探讨PEG-rhCH-2在体内的药代动力学和组织分布,以期掌握PEG-rhCH-2在体内的动态变化规律,为临床安全用药和合理用药提供依据和参考。论文以小鼠作为实验材料,通过静脉注射rhCH-2和PEG-rhCH-2,采用ELISA双抗体夹心法（Double antibody sandwich, DAS-ELISA）从血药浓度-时间关系和组织分布角度分析聚乙二醇（polyethyleneglycol, PEG）修饰对rhCH-2药代动力学的影响,获得了主要的结论如下:①制备了rhCH-2抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记rhCH-2抗体,用于ELISA双抗体夹心法测定小鼠体内rhCH-2和PEG-rhCH-2的血药浓度及组织中的浓度。②采用ELISA双抗体夹心法研究了小鼠经静脉注射PEG-rhCH-2和rhCH-2 3个剂量（5μg/kg、3μg/kg、1μg/kg）后的血药浓度-时间曲线,并应用房室模型方法对rhCH-2和PEG-rhCH-2的药代动力学参数进行估算,结果表明rhCH-2和PEG-rhCH-2在小鼠的体内过程均符合一级消除动力学的二房室模型。rhCH-2的消除半衰期（t1/2β）为0.866±0.18h,PEG-rhCH-2为2.86±0.27h,是rhCH-2的3.30倍。rhCH-2的消除速率常数β,消除率CL,中央室向体外消除速率常数k10和表观分布容积Vd分别为0.799h-1,0.416mL/h·kg,4.38h-1,和9.81L/kg,PEG-rhCH-2为0.244h-1,0.492mL/h·kg,1.40h-1和11.80L/kg,说明PEG修饰能够明显延长rhCH-2的生物半衰期（t1/2）。③采用ELISA双抗体夹心法测定了小鼠经静脉注射rhCH-2和PEG-rhCH-2 5μg/kg后不同时间段肝、脾、肾、心、肺、胃和膀胱等重要组织中的浓度,结果显示除了肾脏和心以外,PEG-rhCH-2在其他各组织中的分布比rhCH-2高,PEG修饰可以提高rhCH-2在组织中的利用率,PEG修饰可以明显改变rhCH-2在体内的分布比例,特别是PEG-rhCH-2在肝脏的分布增加,说明具有较强的组织针对性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪论
• 1.1 研究背景
• 1.1.1 概述
• 1.1.2 蛋白质的PEG 修饰
• 1.1.3 PEG 化对蛋白多肽药物药代动力学的影响
• 1.1.4 蛋白多肽类药物药代动力学的分析方法
• 1.1.5 rhCH-2 的研究
• 1.2 选题背景
• 1.3 研究目的和意义
• 1.4 研究内容
• 1.4.1 技术路线
• 1.4.2 抗体的制备
• 1.4.3 血药浓度－时间曲线
• 1.4.4 组织分布研究
• 1.5 创新点
• 2 实验方法
• 2.1 概述
• 2.1.1 ELISA 分类
• 2.1.2 ELISA 特点
• 2.2 试验材料和仪器
• 2.2.1 材料与试剂
• 2.2.2 实验试剂的配制
• 2.2.3 实验动物
• 2.2.4 仪器与设备
• 2.3 抗体的制备
• 2.3.1 概述
• 2.3.2 实验方法
• 2.3.3 结果与分析
• 2.4 抗体的纯化
• 2.4.1 概述
• 2.4.2 实验方法
• 2.4.3 结果与分析
• 2.5 抗体的标记
• 2.5.1 概述
• 2.5.2 试验方法
• 2.5.3 结果与分析
• 2.6 结论
• 3 小鼠体内的药代动力学实验
• 3.1 概述
• 3.2 材料与试剂
• 3.3 实验动物
• 3.4 仪器与设备
• 3.5 标准曲线的备
• 3.5.1 rhCH-2 标准曲线的制备
• 3.5.2 PEG-rhCH-2 标准曲线的制备
• 3.6 给药方案与样品采集
• 3.7 血药浓度测定
• 3.8 结果与分析
• 3.8.1 血药浓度－时间曲线
• 3.8.2 药代动力学参数分析
• 3.9 结论
• 4 小鼠体内组织分布实验
• 4.1 概述
• 4.2 材料与试剂
• 4.3 实验动物
• 4.4 仪器与设备
• 4.5 标准曲线的制备
• 4.5.1 rhCH-2 标准曲线的制备
• 4.5.2 PEG-rhCH-2 标准曲线的制备
• 4.6 给药方案与样品采集
• 4.7 组织匀浆
• 4.8 组织浓度测定
• 4.9 结果与分析
• 4.10 结论
• 5 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录