囊素三肽单克隆抗体的制备和初步鉴定

论文摘要

囊素三肽（Bursin,BS）是从法氏囊中提取的一种生物活性物质,其分子量大小约为0.354kD。囊素三肽除具有诱导B淋巴细胞分化的功能外,还可促进抗体产生、增强疫苗免疫效果、维持和促使法氏囊的正常发育、预防某些病毒感染及抵抗免疫抑制因子等免疫学功能。本研究利用Sulfo-SMCC法制备出囊素三肽完全抗原,用杂交瘤技术制备出抗BS单克隆抗体,建立了BS单抗的竞争ELISA检测方法。利用Sulfo-SMCC的方法将牛血清白蛋白（BSA）和囊素三肽进行偶联,成功制备免疫抗原,免疫8周龄雌性Balb/c小鼠,同时利用卵清蛋白（OVA）和囊素三肽（BS）进行偶联制备出检测抗原,用于小鼠血清效价的检测和筛选阳性杂交瘤细胞株。免疫后的小鼠脾脏细胞与NS0杂交瘤细胞融合产生分泌BS单抗的杂交瘤细胞株,筛选出3F1特异性杂交瘤细胞株,其产生的单抗命名为3F1-McAb,亚类鉴定为IgM。经过三次有限稀释法克隆后,含3F1-McAb的杂交瘤细胞上清液抗BS的间接ELISA效价最高为1:100。利用高压液相色谱（HPLC）进行分析,结果表明:在3.863min处,有一个比较明显的抗原抗体复合物（BS-3F1-McAb）峰。免疫组化证明,3F1-McAb能与法氏囊中的BS发生特异性反应。竞争性抑制ELISA反应的结果表明,人工合成的囊素三肽可以很好的抑制3F1-McAb与OVA-BS抗原之间的反应。用3F1-McAb建立了囊素三肽的间接竞争ELISA检测方法,对相关条件如OVA-BS包被条件、封闭液种类、封闭时间、酶标二抗最佳反应浓度、酶标二抗的最佳反应时间、底物反应时间进行了优化,利用优化后的实验条件进行间接竞争ELISA检测并建立标准曲线,标准曲线的回归方程为,y=-18.395x+37.937,R2=0.9704。为囊素三肽的免疫学检测方法的建立奠定了基础。囊素三肽单克隆抗体的成功制备为研究囊素三肽免疫机理的和检测囊素三肽奠定了良好的基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 前言
• 1 囊素三肽的研究进展
• 2 研究的内容和意义
• 第二部分 研究内容
• 第一章 BS完全抗原的制备及鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 BS单克隆抗体的制备及鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 竞争ELISA检测BS方法的建立
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介