论文摘要
目的:白血病是人类好发的的恶性肿瘤,是由于造血干细胞增殖分化异常而导致的恶性增殖性疾病。迄今白血病的治疗仍主要采用传统的大剂量联合化疗,但此疗法副作用大,复发率高,而且对正常机体免疫与造血系统有极大的损害。许多中草药可以从蛋白质和分子水平影响造血干细胞的增殖与分化,从而达到重建、恢复造血机能的目的。人参总皂苷(Total saponins of pannax ginseng,TSPG)是人参的主要药理活性成分,我们既往研究表明:TSPG既能促进造血干/祖细胞增殖分化及其信号转导,又能抑制白血病细胞增殖,并可诱导白血病细胞凋亡和向较成熟细胞分化,但其作用机制尚不清楚。鉴于JAK2/STAT5信号途径调控白血病细胞增殖、分化和凋亡中的重要性,我们推测JAK2、STAT5可能参与了TSPG对K562细胞的增殖、分化或凋亡调控。本研究采用免疫细胞化学、Western blotting和ELISA等方法,初步探讨TSPG对K562细胞JAK2、STAT5表达的影响,为发现与寻找TSPG调控白血病细胞增殖、分化或凋亡的分子靶点奠定基础,为临床治疗血液学疾病提供指导。方法:1、体外培养人红白粒系白血病细胞株K562。2、采用免疫细胞化学检测TSPG对K562细胞JAK2、STAT5表达的影响。3、ELISA测定TSPG作用K562细胞前后细胞质JAK2和细胞质、细胞核中STAT5蛋白表达含量的变化。4、采用Western blotting检测TSPG对K562细胞的细胞质JAK2和细胞质、细胞核中STAT5蛋白表达的影响。结果:1、免疫细胞化学染色;用JAK2抗体显示K562细胞JAK2表达,可见对照组K562细胞胞质呈棕褐色;经TSPG 200 mg/L作用12 h后,K562细胞胞质着色变浅。实验组K562细胞胞质平均光密度值0.178±0.08显著低于对照组0.245±0.06(P＜0.05)。2、ELISA及Western blotting检测提示随着TSPG作用K562细胞时间的延长,细胞质中JAK2的表达逐渐减弱。3、免疫细胞化学染色;用STAT5抗体显示K562细胞STAT5表达,可见对照组K562细胞的细胞质和细胞核着色浅淡;经TSPG 200 mg/L作用12h后,K562细胞的细胞质和细胞核着色明显加深,表达增强。4、ELISA及Western blotting检测提示随着TSPG作用K562细胞时间的延长,细胞质和细胞核中STAT5的表达都逐渐增强。结论:1、TSPG降低K562细胞JAK2蛋白的表达,可能与TSPG诱导K562细胞的凋亡及抑制其生长有关。2、TSPG能增强K562细胞STAT5的表达,可能是TSPG诱导K562细胞向红系细胞分化的作用机制之一。
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