论文摘要
甘丙肽（Galanin,GAL）是一个29—30个氨基酸的酰基化神经肽。它广泛分布于中枢神经系统,参与学习记忆、神经内分泌和神经元活动等功能的调节。本文旨在通过一种特殊的胶质细胞——嗅成鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）来研究GAL及其受体（GalR1、GalR2和GalR3）的表达,并进一步探讨GAL对OECs的作用。 为此,实验分为四部分进行。第一部分,选取出生后1～3天的SD大鼠,摘取大脑嗅球,将其最外层——嗅神经层剥离下来,获得OECs培养物。运用阿糖胞苷（Ara-C）处理这些细胞培养物从而纯化出OECs,再用含牛垂体提取物（BPE）的培养液对细胞进行扩大培养。然后运用免疫组化ABC法与免疫荧光细胞化学两种方法进行鉴定。第二部分,为了检测体外培养的OECs是否表达GAL及其三种受体——GalR1、GalR2和GalR3,实验中采用免疫荧光化学的方法来检测GAL蛋白的表达。再运用RT-PCR方法来检测GAL及其三种受体mRNA的表达。第三部分,为了初步了解GAL对新生大鼠OECs的影响,首先,实验中运用MTT法来检测不同浓度的GAL及其受体激动剂（GAL1-11和GAL2-11）和拮抗剂（M35）对OECs增殖的影响。然后采用TUNEL法进一步检测GAL是否引起了细胞的凋亡。第四部分,为了进一步探讨GAL对OECs增殖影响的作用机理,我们将100nM GAL作用于OECs,采用半定量逆转录聚合酶链反应（semiquantitative RT-PCR）检测OECs中几种与神经细胞生长和存活相关的营养因子（LIF、CNTF、GDNF、NTN和BDNF）表达的变化。旨在通过这几种营养因子表达的变化,来探究GAL的相关作用机理。实验以人的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase G3PDH）作为内参照。 实验结果: 1)经过上述分离与纯化细胞的方法,我们成功地获得OECs,细胞纯度达到90—93%,并且OECs在体外能够稳定的生长。
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相关论文文献
- [1].Galanin(甘丙肽)及其受体在成年小鼠脑内神经新生部位的表达及对神经干细胞分化的作用[J]. 分子细胞生物学报 2008(05)
- [2].快速眼动睡眠剥夺大鼠中缝背核内galanin阳性神经元表达及抑郁行为的研究[J]. 神经解剖学杂志 2010(03)
- [3].饥饿对幼年斑马鱼下丘脑摄食相关性神经肽表达的影响[J]. 遗传 2016(09)
标签：嗅成鞘细胞论文; 分离论文; 纯化论文; 受体论文; 激动剂论文; 拮抗剂论文; 增殖论文; 神经营养因子论文; 表达论文;