论文摘要
目的:了解淋巴细胞白血病及T细胞株的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况,分析TCR Vβ基因独特型表达的特点,并构建具有抗淋巴细胞白血病作用的TCR独特型DNA疫苗。 方法:利用RT-PCR方法扩增6个不同T细胞株和初发未治的6例T-ALL及13例B-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性,部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。用RT-PCR方法扩增特异性重排的Jurkat细胞TCR Vβ8 CDR3序列和Molt4细胞TCR Vβ2 CDR3序列,分别克隆到真核表达载体pIRES中。将经测序鉴定正确的重组质粒转染K562细胞,Western-Blot等方法检测其蛋白表达的情况。 结果:6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族,13例B-ALL病人分别表达2～18个Vβ亚家族。所有病人均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆。B-ALL病人中Vβ21和Vβ23亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞,不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。 构建了Jurkat细胞独特型TCR Vβ8 DNA重组质粒pIRES-Jurkat Vβ8和Molt4细胞独特型TCR Vβ2 DNA重组质粒pIRES-MOLT4 Vβ2①/②。经测序鉴定仅plRES-MOLT4 Vβ2②的序列正确,将其转染K562细胞后可表达一能与TCR Vβ2抗体特异性结合的蛋白,大小约为15KD。 结论:T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变,均可检测到克隆性增殖T细胞,尚需进一步鉴定其性质（肿瘤性或抗原特异性增殖）,对于研究微小残留病变检测和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。B-ALL病人外周血T细胞的TCR Vβ谱系呈现优势利用的特点,并存在克隆性增殖的T细胞,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应;Vβ21和Vβ23亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显,可能与B-ALL相关抗原刺激有关。T细胞株中检测到的肿瘤克隆其CDR3序列具有高度的特异性,是构建DNA疫苗的基础。成功构建了Molt4细胞独特型TCR Vβ2 DNA重组质粒pIRES-Molt4 Vβ2②,可在体外表达特异性的TCR Vβ2蛋白。
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