论文摘要
目的:大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势。近年来,尽管手术、放疗、化疗等综合治疗使大肠癌的术后生存得到了很大的改善,但是疗效并不乐观。大肠癌患者早期常无明显症状,多数患者就诊时即已为中、晚期,还有15-35%就诊时就已经发生转移,而肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的重要原因之一。早在70年代末,人们就发现肿瘤转移可能与一类肝素样物质的作用有关,并对肝素在肿瘤转移中的作用进行深入研究。80年代初期,乙酰肝素和乙酰肝素酶的发现为肿瘤转移研究开辟了新的领域。肿瘤侵袭转移必须突破细胞外基质（ECM）和血管内皮下基膜（BM）屏障,硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG）是一种蛋白聚糖类碳水化合物,为广泛存在于有脊椎动物和无脊椎动物组织细胞外基质（ECM）和细胞表面的生物大分子,是基底膜的主要构成成分。乙酰肝素酶（Heparanase,HPA）是一种葡萄糖醛酸内切酶,也是目前发现的唯一可以降解HSPG的酶,它通过切断硫酸乙酰肝素蛋白多糖侧链（HS）以降解细胞外基质和血管基膜,并通过释放和活化HSPG结合型的生长因子（如bFGF,VEGF等）诱导血管生成,从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移。随着对HPA与肿瘤侵袭转移关系及HPA抑制剂的深入研究,HPA将成为抗肿瘤治疗的新靶点。本研究从基因和蛋白水平分别检测了HPA在大肠癌患者的正常大肠粘膜组织、大肠癌原发灶、转移淋巴结和非转移淋巴结中的表达情况,并结合临床病理资料进行分析,以探讨HPA与大肠癌转移的关系。方法:1免疫组织化学法:采用SP法,按照试剂盒说明书进行操作,用1:60稀释的兔抗人HPA多克隆抗体分别检验各标本中HPA蛋白的表达情况,PBS代替一抗作为阴性对照。结合临床病理资料对其结果进行相关统计学分析。2半定量RT-PCR法:采用RT-PCR法在相同条件下扩增所取标本中HPA和内对照β-action的表达情况,测出HPA的表达水平（当HPA和β-action的比值大于0.5时为高表达,小于0.5时为低表达）,然后进行统计学分析。结果:免疫组化结果显示HPA蛋白在大肠癌患者正常大肠粘膜、大肠癌原发灶、非转移淋巴结和转移淋巴结的表达率分别为16.67%（8/48）、68.75%（33/48）、5.71%（2/35）、82.20%（37/45）。所取的48例大肠癌原发灶标本中有9例伴有同期肝脏转移,有13例经病理确诊为低分化腺癌,13例为中分化腺癌,22例为高分化腺癌。在41例浆膜受侵的癌组织中有31例HPA表达阳性,阳性率75.61%（31/41）。在7例浆膜内浸润的癌组织中,HPA阳性率28.57%（2/7）。HPA在高、中分化腺癌中的阳性表达率分别为45.45%和76.92%,在低分化腺癌中的表达率为53.85%。9例伴有同期肝脏转移的大肠癌组织中HPA均为阳性表达。经统计学分析可知,大肠癌原发灶中HPA的表达明显高于正常大肠粘膜（χ2=23.04 P<0.05）,具有统计学意义;转移淋巴结HPA表达阳性率显著高于非转移淋巴结（P<0.05）;有淋巴结转移的癌组织HPA表达明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）;TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的癌组织表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期（P<0.05）;按照Dukes分期Dukes C、D期组HPA蛋白表达高于Dukes A、B期（P<0.05）;在浸润深度超出浆膜层的大肠癌组织中HPA的表达阳性率高于浆膜内浸润的大肠癌组织（P<0.05）。将大肠癌原发灶中HPA蛋白的表达情况与临床病理资料结合进行分析,发现患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度与大肠癌原发灶中HPA蛋白的表达情况无明显相关性（P>0.05）。在RT-PCR所检测的40例大肠癌病人标本中,HPAmRNA在正常大肠粘膜,非转移淋巴结,大肠癌原发灶及转移淋巴结中的表达率分别为5%（2/40）、13.33%（2/15）、75%（30/40）和78.13%（25/32）。所取40例标本经病理确诊有14例为高分化腺癌,有13例为低分化腺癌,13例为中分化腺癌,7例确诊同期伴有肝脏转移中,HPA的阳性表达率为85.71%（6/7）。在31例浆膜受侵的癌组织中有28例HPA表达阳性,阳性率90.32%（28/31）。在9例浆膜内浸润的癌组织中,HPA阳性率33.33%（3/9）。HPA在高、中分化腺癌中的阳性表达率分别为71.42%和76.92%,在低分化腺癌中的表达率为76.92%。其中HPA在大肠癌组织中的表达率明显高于正常粘膜（P<0.05）;有淋巴结转移组HPA表达明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）;转移淋巴结中的HPA表达情况明显高于非转移淋巴结（P<0.05）,其中TNM分期Ⅲ～Ⅳ期组的癌组织HPA表达高于Ⅰ～Ⅱ期组。Dukes C、D期组的HPA表达明显高于Dukes A、B期组（P<0.05）。在浸润深度超出浆膜层的大肠癌组织中,HPA的表达阳性率高于浆膜内浸润的大肠癌组织（P<0.05）。结论:1 HPA在转移淋巴结及同期伴有肝脏转移灶的大肠癌组织中表达阳性率高,提示HPA与大肠癌的转移有关。2 HPA随着肿瘤浸润深度的增加表达增强,表明HPA与大肠癌患者的疾病进展有关。3 HPA在大肠癌原发灶的表达明显高于正常大肠粘膜,表明HPA与大肠癌的发生有关。4 HPA的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无明显相关性。