地锦草抗宫颈癌活性研究

论文摘要

子宫颈癌在世界各地都有发生,是人体最常见的癌瘤之一,不但在女性生殖器官癌瘤中占首位,而且是女性各种恶性肿瘤中最多见的癌瘤,对女性健康造成的危害相当之大。对于宫颈癌如今采用最多的是手术治疗和放射治疗,但两者都有着很多副作用且很难根治。中草药在癌症方面的治疗已经被越来越多的人关注和研究。地锦草系大戟科植物,一年生匍匐小草本,有白色乳汁,生于田野、路旁。我国各地均有分布,资源十分丰富,也称地锦、血见愁、红茎草、铺地锦、奶汁草、斑鸠窝、地瓣草、血筋草。地锦草单方用于治疗急慢性肝炎效果显著,在医学临床上主要用于治疗菌痢腹泻,针剂则用于治疗慢性支气管炎和急性支气管炎。在兽医临床上,林家义等用地锦草治疗猪胃肠炎,疗效显著;薛志成（2003）用地锦草复方治疗雏鸡白痢,有效率达92%。但关于地锦草抗宫颈癌活性的研究国内外还未见报道。本研究利用水煎法得到地锦草水提物,用于已建立U14实体瘤模型的小鼠,研究其抗癌活性,得到如下结果:1.建立U14宫颈癌实体模型,对荷瘤小鼠给予不同浓度地锦草水体物治疗,得到抑瘤率分别为44.7%、66.7%,且使免疫器官指数明显增加。2.对小鼠血清进行抗氧化能力测试,与阴性对照组相比较地锦草水提物处理组可以显著提高SOD、CAT和T-AOC活力,揭示地锦草可以提高机体抗氧化能力。3.对小鼠肿瘤组织进行相关蛋白表达量分析,得到地锦草水提物可显著下调突变型p53表达,上调p19ARF蛋白表达,对Caspase-3及Caspase-9表达无明显影响。揭示地锦草可以调控与某些肿瘤相关特异性蛋白表达,达到诱导细胞凋亡,推测地锦草可能不是通过线粒体途径诱导凋亡。4.不同浓度地锦草水提物处理Hela细胞,通过MTT试验得到抑制率分别为71.5%、72.6%和80.9%,揭示地锦草可抑制Hela细胞增殖。5.地锦草处理过的细胞进行Hoechst染色,试验结果与阴性组相比较地锦草处理过的细胞出现更多的凋亡形态变化,揭示地锦草可以诱导Hela细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 宫颈癌的分子机制和治疗现状
• 1.1.1 宫颈癌的分子机制
• 1.1.2 抗肿瘤药材治疗现状
• 1.2 地锦草的药理作用
• 1.2.1 抗氧化作用
• 1.2.2 止血作用
• 1.2.3 抗菌作用
• 1.2.4 抑制肾功能损伤
• 1.2.5 提高免疫能力
• 1.2.6 临床作用
• 1.3 诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展
• 1.3.1 阻滞增殖周期
• 1.3.2 肿瘤相关基因的表达
• 1.3.3 提高抗氧化能力途径
• 1.3.4 线粒体途径和信号传递
• 1.3.5 降低端粒酶的活性
• 1.3.6 调节细胞内PH
• 1.4 小结
• 第二章 地锦草对荷瘤小鼠瘤重和免疫器官影响
• 2.1 材料
• 2.1.1 药品和试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 试验动物和细胞株
• 2.2 方法
• 2.2.1 地锦草水提物的制备
• 2.2.2 U14 宫颈癌小鼠腹水瘤模型建立
• 2.2.3 U14 宫颈癌小鼠实体瘤模型建立
• 2.2.4 试验分组和治疗方案
• 2.2.5 抑瘤率的测定
• 2.2.6 地锦草对脾脏和胸腺指数影响
• 2.2.7 统计学方法
• 2.3 结果
• 2.3.1 地锦草对小鼠肿瘤重量影响
• 2.3.2 地锦草对小鼠脾脏和胸腺指数影响
• 2.4 讨论
• 2.4.1 地锦草对肿瘤重量影响
• 2.4.2 地锦草对脾脏、胸腺指数影响
• 2.5 小结
• 第三章 地锦草对荷瘤小鼠抗氧化防御体系影响
• 3.1 材料
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 仪器
• 3.2 方法
• 3.2.1 U14 宫颈癌小鼠实体瘤模型建立
• 3.2.2 试验分组和治疗方案
• 3.2.3 总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的测定
• 3.2.4 过氧化氢酶（Catalase CAT）活力测定
• 3.2.5 总抗氧化能力（T-AOC）测定
• 3.2.6 统计方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 总SOD 活力测定结果
• 3.3.2 CAT 活力测定结果
• 3.3.3 T-AOC 能力测试结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 地锦草处理对肿瘤组织中特异性蛋白表达影响的研究
• 4.1 材料
• 4.1.1 试剂
• 4.1.2 仪器
• 4.2 方法
• 4.2.1 U14 宫颈癌小鼠实体瘤模型建立
• 4.2.2 试验分组和治疗方案
• 4.2.3 免疫组化检测突变型p53 蛋白和p19ARF 表达
• 4.2.4 流式细胞术检测Caspase-3 和Caspase-9 表达
• 4.2.5 统计方法
• 4.3 结果
• 4.3.1 免疫组化检测突变型p53 蛋白p19ARF 表达结果
• 4.3.2 流式细胞术检测Caspase-3 和Caspase-9 表达结果
• 4.4 讨论
• 4.4.1 免疫组化法检测突变型p53 和p19ARF 蛋白表达
• 4.4.2 流式细胞术检测Caspase-3 和Caspase-9 表达
• 4.5 小结
• 第五章 地锦草在体外抗宫颈癌活性研究
• 5.1 材料
• 5.1.1 试剂
• 5.1.2 仪器
• 5.2 方法
• 5.2.1 Hela 细胞复苏
• 5.2.2 Hela 细胞传代
• 5.2.3 细胞增殖试验（MTT 法）
• 5.2.4 Hoechst 染色
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 MTT 检测结果
• 5.3.2 Hoechst 染色结果
• 5.4 讨论
• 5.4.1 MTT 法
• 5.4.2 Hoechst 染色
• 5.5 小结
• 结论
• 创新点
• 参考文献
• 附件
• 致谢
• 作者简介