黄芪注射液抗心肌细胞缺血再灌注损伤作用及机制研究

论文摘要

目的 研究黄芪注射液抗心肌细胞再灌注损伤的作用,并初步探讨其机制。方法研究分为三部分。第一部分采用间生态离体兔心共生支持系统模型,研究黄芪与模拟酶对离体兔心再灌注损伤的保护。24只离体兔心脏随机分为三组:对照组,模拟酶组,黄芪组,每组8只。分别采用St.Thomas’液,St.Thomas’液+黄芪,St.Thomas’液+模拟SOD酶进行心肌保护。常温缺血45min。再灌注60min。记录缺血再灌注前后血流动力学,心肌酶等指标的变化,比较黄芪注射液和模拟SOD酶的心肌保护作用。第二部分和第三部分采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,研究黄芪对细胞再灌注损伤的保护,初步探讨p42/p44 MAPK信号途径在黄芪注射液诱导的心肌保护中的作用。培养细胞随机分为五组:正常对照组,缺氧组,黄芪组,PD98059组,黄芪+PD98059组。缺氧过程中,给予黄芪和/或抑制剂PD98059,缺氧4h,复氧2h。比较缺氧复氧前后心肌细胞存活率,培养液中心肌酶,p42/p44蛋白,一氧化氮合酶（NOS）蛋白和NOSmRNA表达情况。结果离体兔心再灌注损伤研究表明黄芪组和模拟SOD酶组血流动力学和心肌酶变化优于对照组。黄芪对心脏功能的保护与模拟酶没有明显差异。培养心肌细胞缺氧复氧研究表明,黄芪能够引起正常心肌细胞和缺氧复氧心肌细胞eNOSmRNA和蛋白表达,与对照组相比能够减轻心脏再灌注损伤。加入抑制剂PD98059减弱了其对缺血再灌注心肌的保护作用。结论黄芪能够减轻缺血再灌注损伤,其机制涉及了p42/p44 MAPK信号途径。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
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• 前言
• 第一部分 黄芪与模拟酶对离体兔心再灌注损伤的保护
• 1 材料和方法
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 主要试剂和溶液配制
• 1.3 动物模型建立和实验分组
• 1.4 标本处理及观察指标
• 1.5 统计方法
• 2 结果
• 2.1 左室功能评价
• 2.2 心肌酶
• 2.3 心肌早期缺血的观察
• 3 讨论
• 第二部分 黄芪对培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的保护
• 实验一 心肌细胞培养及生物学特性鉴定
• 1 材料和方法
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 试剂和溶液配制
• 1.3 原代心肌细胞培养
• 1.4 培养细胞鉴定
• 1.5 细胞活性鉴定及活性率检测
• 1.6 Giemsa染色和过碘酸—Schiff反应（PAS染色）
• 1.7 生长曲线测定
• 1.8 统计方法
• 2 结果
• 2.1 培养心肌细胞形态和活力观察
• 2.2 培养心肌细胞活性鉴定及活性率检测
• 2.3 培养心肌细胞纯度
• 2.4 Giemsa染色和PAS染色
• 2.5 生长曲线
• 3 讨论
• 实验二 黄芪对正常乳鼠心肌细胞的作用研究
• 1 材料和方法
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 试剂
• 1.3 原代心肌细胞培养
• 1.4 黄芪浓度对正常心肌细胞增殖的影响
• 1.5 黄芪浓度对培养液内心肌酶的影响
• 1.6 统计方法
• 2 结果
• 2.1 不同浓度黄芪对心肌细胞生长曲线的影响（CCK-8）
• 2.2 不同浓度黄芪对心肌细胞心肌酶的影响
• 3 讨论
• 实验三 黄芪对乳鼠心肌细胞再灌注损伤的保护作用
• 1 材料和方法
• 1.1 仪器设备
• 1.2 试剂和溶液配制
• 1.3 原代心肌细胞培养
• 1.4 缺氧／复氧心肌细胞模型制备
• 1.5 黄芪浓度对缺氧／复氧细胞凋亡影响
• 1.6 黄芪作用时间对缺氧／复氧细胞凋亡影响
• 1.7 黄芪对缺氧／复氧细胞存活的影响
• 1.8 加入ERK抑制剂对黄芪心肌保护作用的影响
• 1.9 统计方法
• 2 结果
• 2.1 培养液心肌酶的变化
• 2.2 黄芪对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响（流式细胞仪）
• 2.3 加入ERK和NOS抑制剂对黄芪心肌保护作用的影响
• 3 讨论
• 第三部分 黄芪注射液调节培养乳鼠心肌细胞ERK信号转导通路抗再灌注损伤的初步研究
• 实验一 黄芪注射液对正常乳鼠心肌细胞ERK信号转导通路活化的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 主要仪器
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要试剂配制
• 1.4 原代心肌细胞培养
• 1.5 黄芪对正常心肌细胞ERK1／2活化和NOS表达的量效关系
• 1.6 黄芪对正常心肌细胞ERK1／2活化和NOS表达的时效关系
• 1.7 Western Blot免疫印迹检测ERK、pERK、NOS3、NOS2蛋白表达
• 2 结果
• 2.1 黄芪浓度对心肌细胞ERK信号转导的影响
• 2.2 黄芪作用时间对心肌细胞ERK信号转导的影响
• 实验二 黄芪对缺氧复氧乳鼠心肌细胞信号转导通路活化的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 原代心肌细胞培养
• 1.2 缺氧／复氧心肌细胞模型制备及实验分组
• 1.3 RT-PCR检测各组NOS3、NOS2mRNA表达水平
• 1.4 Western Blot免疫印迹检测蛋白表达
• 2 结果
• 2.1 黄芪对缺氧／复氧心肌细胞NOS3、NOS2mRNA表达的影响
• 2.2 缺氧／复氧对心肌细胞ERK和NOS蛋白表达的影响
• 3 讨论
• 正文参考文献
• 文献综述
• 综述参考文献
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢