论文摘要
目的在已克隆细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus,Eg）亲肌肉抗原（ Myophilin ）基因的基础上,构建重组原核表达质粒myophilin /pET-28a/BL21（DE3）plysS,表达并纯化出重组蛋白Eg.myophilin,进行动物免疫保护力实验及免疫机制研究;为筛选有价值的包虫病候选疫苗分子奠定基础。方法（1）从构建的myophilin/pGEM-T/JM109工程菌株中双酶切目的DNA片段;（2）将目的片段重组于表达质粒载体pET-28a,并进行诱导表达、纯化;并通过实验动物对重组myophilin进行免疫学特性的鉴定;（3）将纯化后的重组抗原myophilin免疫ICR小鼠,观察其保护力及研究其免疫机制:①通过计数包囊数,计算减蚴率,得出其免疫保护力;②通过小鼠T淋巴细胞亚群、细胞因子变化、MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况来研究重组myophilin诱导小鼠产生免疫保护力的机制。结果（ 1 ）成功构建Eg.myophilin/pET-28a/BL21（DE3）plysS重组表达质粒,表达并纯化出分子量约为29kDa的Eg.myophilin;（2） Western blot显示免疫小鼠血清能够有效识别重组蛋白;ELISA法检测结果表明,原头蚴、囊液等天然抗原均可被免疫小鼠血清识别,与对照组相比有显著的差异（P<0.05）。提示,重组抗原可很好的诱导免疫小鼠产生特异性抗体;（3）用重组抗原Eg.myophilin免疫ICR小鼠,其减蚴率为94.46%;（4）Eg.myophilin免疫组在免疫后和剖杀后均产生高水平的IgG、IgG1、IgG2a抗体,IgE水平在剖杀后也升高,提示IgG、IgG1、IgE可能参与保护性的免疫应答机制。（5）Eg.myophilin免疫组小鼠在攻击感染后不仅CD4+T细胞增加,CD8+T细胞也有轻度增加,CD4+/CD8+比值与PBS对照组比较有所增加。（6）Eg.myophilin免疫组在攻击感染后产生高水平的IL-2和IFN-γ,低水平的IL-4,提示该重组抗原以诱导Th1型免疫应答为主的反应;同时攻击感染后进行脾淋巴细胞增殖试验,MTT法检测证实Eg.myophilin免疫的小鼠在抗原刺激下脾淋巴细胞增殖水平明显高于PBS对照组（P<0.01）。结论（1）成功构建高效融合表达基因工程菌株Egmyophilin/pET28a/BL21（DE3）plysS。表达并纯化出重组Eg.myophilin;（2）研究证实,重组Eg.myophilin具有较好的免疫原性和抗原性,可望作为包虫病疫苗侯选分子,值得进一步深入研究;（3）Eg.myophilin能诱导小鼠产生部分免疫保护力,其保护性免疫主要通过诱导宿主产生体液免疫应答和Th1型免疫应答;（4）经文献检索,国内尚未报道有关Eg.myophilin基因重组蛋白的表达、纯化及免疫学特性及免疫机制的研究。