鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及二价灭活疫苗的研制

论文摘要

鸭传染性浆膜炎病是由鸭疫里默氏杆菌引起的接触性传染病。该病以2-8周龄鸭最易感,呈急性或慢性败血症。患病鸭常出现眼、鼻分泌物增多、拉稀、共济失调、头颈震颤等症状。剖检以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎部分病例出现干酪性输卵管炎、结膜炎、关节炎,死亡率10%～80%,耐过鸭生长迟缓、饲料报酬显著下降。由于该病可通过污染的饲料、饮水、飞沫、尘土等经呼吸道、消化道和皮肤损伤等途径传播,在发病鸭场持续存在,难以扑灭,因此被认为是造成养鸭业经济损失最严重的疫病之一。通过2008年对山东临沂、青岛等地的疑似鸭传染性浆膜炎病死鸭进行细菌分离,共分离细菌14株,经形态特征、生化特性、培养特性、PCR鉴定和血清定型表明14株均为鸭疫里默氏杆菌,其中6株为血清1型、5株为血清2型,其余三株未定型。用分离株制备新鲜菌液,调整菌液浓度为1×109CFU/ml,对两周龄雏鸭进行回归动物试验,攻毒后10日内试验鸭全部不同程度的发病和死亡。药敏试验显示分离菌对菌必治、头孢氨苄、氟苯尼考、庆大霉素、头孢噻肟、先锋霉素VI比较敏感,而大部分菌株对泰乐菌素、氟哌酸、四环素、氧氟沙星、环丙沙星、复方新诺明存在一定程度的耐药性。选取免疫原性良好的血清1型RA-sd3菌株和血清2型RA-sd2菌株,制备鸭疫里默氏杆菌高免血清,并建立了用于检测鸭血清中鸭疫里默氏杆菌抗体的微量凝集试验（Microagglutination test, MAT）方法。在96孔V型微量反应板中,用50μL0.85%的灭菌生理盐水将50u L待检血清进行倍比稀释后,加入50μ L凝集抗原（OD600值=1.452）,放置湿盒中37℃反应4h,即可观看反应结果。制备的凝集抗原在4℃条件下可保存5个月。此方法特异、敏感、成本较低、简单易行便于推广使用。选用免疫原性良好的鸭疫里默氏杆菌1型RA-sd3菌株和2型RA-sd2菌株接种胰蛋白胨大豆肉汤培养基,收获培养物,调节菌量为1.2×1010CFU/ml,用终浓度为0.3%的甲醛溶液灭活后等量混合,按照水相：油相=1：2的比例乳化制备鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗。用安全检验合格的疫苗颈部皮下免疫3-7日龄雏鸭,0.3ml/只,21天后攻毒保护率可达9/10以上,免疫保护期可维持两个月。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩写词表
• 鸭疫里默氏杆菌的研究进展
• 1 病原学
• 1.1 病原的命名与分类地位
• 1.2 形态及染色特征
• 1.3 培养特性
• 1.4 理化特征
• 1.5 血清学特征
• 1.6 致病性
• 2 鸭传染性浆膜炎病的研究进展
• 2.1 流行特点
• 2.2 临床症状
• 2.3 病理变化
• 2.4 诊断方法
• 2.5 防治措施
• 第二章 鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三章 鸭疫里默氏杆菌检测方法的建立
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第四章 鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗的研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 全文结论
• 附录
• 致谢