LRIG1抑癌基因对人脑胶质瘤细胞的作用和分子机制

论文题目: LRIG1抑癌基因对人脑胶质瘤细胞的作用和分子机制

论文类型: 博士论文

论文专业: 神经外科

作者: 易伟

导师: 薛德麟

关键词: 星形细胞瘤,表皮生长因子受体,原位杂交,原代培养,免疫组化,塞唑蓝实验,质粒构建,基因转染,放射性受体结合实验,免疫印迹

文献来源: 华中科技大学

发表年度: 2005

论文摘要: 研究背景与目的:LRIG1基因是新发现的与果蝇Kek-1基因结构相似的人类基因组成员。Kek-1基因编码一种果蝇细胞表面跨膜蛋白——Kek-1蛋白,它参与果蝇表皮生长因子受体(EGFR)信号系统的负反馈调节。人类LRIG1蛋白是一种跨膜糖蛋白,在脑组织表达较高。LRIG1与人类肿瘤尤其是与脑组织发生的肿瘤的关系还不明确,与人类EGFR的关系和机制仍然未知。本研究的目的在于以人脑胶质瘤为平台,研究LRIG1与人类肿瘤的关系,探讨LRIG1与EGFR的相互作用及其内在分子机制。方法:首先设计、制作LRIG1 mRNA寡核苷酸探针,用原位杂交方法检测LRIG1 mRNA在人星形细胞瘤组织和肿瘤周边组织中表达的差异,分析这种差异与肿瘤级别的关系(第一部分);然后原代培养星形细胞瘤细胞,观察LRIG1表达对肿瘤细胞增殖及对表皮生长因子(EGF)促肿瘤细胞增殖作用的影响(第二部分);接着利用PCR技术和基因重组技术,构建含LRIG1胞外段+跨膜段(LRIG1-ET)和LRIG1跨膜段+胞内段(LRIG1-TC)的转基因质粒,并分别检测它们在真核细胞中的表达和亚细胞定位(第三部分);最后,将上述两个构建的质粒及含LRIG1全长(LRIG1-FL)的质粒(惠赠)转入胶质瘤细胞系U251或原代星形细胞瘤细胞,用放射性受体结合试验检测转染细胞表皮生长因子受体(EGFR)结合EGF能力的变化,用western blot检测EGFR下游信号MEK活化的变化,用MTT实验观察转染后细胞生长活性的变化。结果:相对于肿瘤周边脑组织表达的LRIG1(91.43±3.77%),人星形细胞瘤表达LRIG1下调(69.98±15.75%),下调的程度与肿瘤级别相关;肿瘤组织、培养的肿瘤细胞表达的LRIG1均与其表达的PCNA呈负相关,LRIG1表达高对EGF的促肿瘤增殖有抑制作用;构建的质粒序列正确,可在真核细胞中表达,表达产物均主要位于胞膜、部分位于胞浆;转染含LRIG1 ET、TC、FL的质粒均使细胞表面EGF受体解离常数(KD)增大,最大结合位点(Bmax)减少,其中转染LRIG1-ET的细胞KD增大最明显(增加135.50%),转染LRIG1-FL者Bmax减少最明显(减少40.05%);使细胞内MEK磷酸化程度下降和细胞生长抑制最明显的是

论文目录:

缩略词

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英文摘要

正文： LRIG1 抑癌基因对人脑胶质瘤细胞的作用和分子机制

前言

第一部分 LRIG1 mRNA 在人脑胶质瘤中的表达下调

摘要

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 LRIG1 抑制星形细胞瘤细胞增殖的机制

摘要

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分转基因质粒pIRE52-EGFP-3XFLAG-LRIG1-ET 和p3XFLAG-LRIG1-CT 的构建和表达

摘要

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四部分 LRIG1 作用于表皮生长因子受体的位点和机制

摘要

材料与方法

结果

讨论

参考文献

小结

综述表皮生长因子受体家族负向调节研究进展

附录一：彩图

附录二：在读期间发表的论文

致谢

感谢下列基金给予的资助

发布时间: 2007-01-12

参考文献

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[3].miR-136对人脑胶质瘤细胞的生物学作用观察及相关因素探讨[D]. 于强.武汉大学2016
[4].地钱素C和褐藻多糖对胶质瘤微环境中血管生成的影响及机制研究[D]. 吕亚峰.山东大学2011
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